Microscopie corneană confocală cu durată de viață

Microscopia confocală a corneei este una dintre metodele moderne de cercetare; permite monitorizarea intravitală a corneei cu vizualizarea țesuturilor la nivel celular și microstructural.

Această metodă, datorită designului original al microscopului și puterii sale de rezoluție ridicate, permite vizualizarea țesutului cornean viu, măsurarea grosimii fiecărui strat al acestuia și evaluarea gradului de tulburări morfologice.

Scopul microscopiei confocale corneene

Caracterizarea modificărilor morfologice ale corneei care apar în diverse boli inflamatorii și distrofice, precum și ca urmare a intervențiilor chirurgicale și a expunerii la CL.

Datele examenului morfologic sunt necesare pentru a evalua severitatea procesului patologic, eficacitatea tratamentului și pentru a determina tacticile de gestionare a pacientului.

Indicații pentru procedură

• Boli inflamatorii ale corneei ( keratită ).
• Boli distrofice ale corneei ( keratoconus, distrofie Fuchs etc.).
• Sindromul de ochi uscat.
• Afecțiuni după intervenții chirurgicale pe cornee ( transplant penetrant de cornee, intervenții chirurgicale keratorefractive).
• Afecțiuni asociate cu purtarea lentilelor de contact.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Preparare

Această examinare poate fi efectuată fără utilizarea anestezicelor. O picătură de lichid de imersie este plasată pe lentila obiectivă a microscopului confocal. Acest lucru elimină contactul direct al lentilei cu corneea și minimizează riscul de deteriorare a epiteliului.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Tehnică microscopie confocală a corneei

Studiul se realizează cu ajutorul unui microscop confocal ConfoScan 4 (Nider) cu o mărire de 500 de ori. Dispozitivul permite examinarea corneei pe întreaga sa grosime.

Dimensiunea zonei examinate este de 440×330 μm, grosimea stratului de scanare este de 5 μm. Lentila cu o picătură de gel este adusă la nivelul corneei până la atingere și este instalată astfel încât grosimea stratului de lichid de imersie să fie de 2 mm. Designul dispozitivului permite examinarea corneei în zona centrală și în zonele sale paracentrale.

Contraindicații la procedură

O contraindicație relativă este iritația oculară severă cauzată de un proces inflamator acut.

[ 10 ], [ 11 ]

Performanță normală

Imagine morfologică normală a corneei

Epiteliul anterior este alcătuit din 5-6 straturi de celule. Grosimea medie a întregului epiteliu este de aproximativ 50 µm. Conform structurii morfologice, se disting următoarele straturi (din interior spre exterior): bazale, celule în formă de sulă și superficiale.

• Stratul cel mai interior (bazal) este reprezentat de celule mici, dense, cilindrice, fără nucleu vizibil. Limitele celulelor bazale sunt clare și luminoase.
• Stratul mijlociu este alcătuit din 2-3 straturi de celule spinoase (aripate) cu invaginări adânci în care sunt încorporate excrescențe ale celulelor vecine. Microscopic, limitele celulare sunt destul de clar distincte, iar nucleii pot să nu fie definiți sau pot fi neclari.
• Stratul superficial al epiteliului este reprezentat de unul sau două straturi de celule poligonale cu limite clare și densitate omogenă. Nucleii sunt de obicei mai luminoși decât citoplasma, în care se poate distinge și un inel întunecat perinuclear.

Printre celulele stratului superficial se disting celulele întunecate și cele deschise la culoare. Reflectivitatea crescută a celulelor epiteliale indică o scădere a ratei lor metabolice și începutul descuamării lor.

Membrana lui Bowman este o structură transparentă care nu reflectă lumina, așa că în mod normal este imposibil să o vizualizăm cu microscopia confocală.

Plexul nervos subbazal este situat sub membrana lui Bowman. În mod normal, fibrele nervoase apar ca dungi strălucitoare care se desfășoară paralel pe un fundal întunecat, contactându-se între ele. Reflectivitatea (reflectivitatea) poate fi neuniformă de-a lungul fibrei.

Stroma corneană ocupă 80 până la 90% din grosimea corneei și este alcătuită din componente celulare și extracelulare. Principalele elemente celulare ale stromei sunt keratocitele; acestea reprezintă aproximativ 5% din volum.

O imagine microscopică tipică a stromei include mai multe corpuri ovale neregulate, strălucitoare (nuclei de keratocite), care se află în grosimea unei matrice transparente gri închis sau neagră. În mod normal, vizualizarea structurilor extracelulare este imposibilă din cauza transparenței lor. Stroma poate fi împărțită condiționat în substraturi: anterior (situat direct sub membrana Bowman și reprezintă 10% din grosimea stromei), anterior-mijlociu, mijlociu și posterior.

Densitatea medie a keratocitelor este mai mare în stroma anterioară, scăzând treptat spre straturile posterioare. Densitatea celulelor stromale anterioare este aproape de două ori mai mare decât cea a celulelor stromale posterioare (dacă densitatea celulelor stromale anterioare este considerată 100%, atunci densitatea celulelor stromale posterioare va fi de aproximativ 53,7%). În stroma anterioară, nucleii keratocitelor au o formă rotunjită de fasole, în timp ce în stroma posterioară sunt ovali și mai alungiți.

Nucleii keratocitelor pot varia în luminozitate. Capacitatea diferită de a reflecta lumina depinde de starea lor metabolică. Celulele mai luminoase sunt considerate a fi keratocite activate (celule „de stres”), a căror activitate vizează menținerea homeostaziei interne a corneei. În câmpul normal și vizual, se găsesc celule activate singulare.

Fibrele nervoase din stroma corneană anterioară sunt vizualizate ca benzi omogene strălucitoare, formând adesea bifurcații.

Membrana lui Descemet este în mod normal transparentă și nu este vizualizată prin microscopie confocală.

Epiteliul posterior este un monostrat de celule plate hexagonale sau poligonale cu o suprafață uniform deschisă la culoare pe un fundal de limite intercelulare clare și întunecate.

Dispozitivul are capacitatea de a calcula manual sau automat densitatea celulelor, aria acestora și coeficientul de variabilitate.

Modificări patologice ale structurii corneei

Keratoconusul se caracterizează prin modificări semnificative ale epiteliului anterior și ale stromei corneei.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]