Expert medical al articolului
Noile publicații
PCR ca metodă de diagnosticare a bolilor genetice
Ultima examinare: 23.04.2024
Tot conținutul iLive este revizuit din punct de vedere medical sau verificat pentru a vă asigura cât mai multă precizie de fapt.
Avem linii directoare de aprovizionare stricte și legătura numai cu site-uri cu reputație media, instituții de cercetare academică și, ori de câte ori este posibil, studii medicale revizuite de experți. Rețineți că numerele din paranteze ([1], [2], etc.) sunt link-uri clickabile la aceste studii.
Dacă considerați că oricare dintre conținuturile noastre este inexactă, depășită sau îndoielnică, selectați-o și apăsați pe Ctrl + Enter.
PCR este o nouă realizare în genetica moleculară, utilizată pentru amplificarea ADN și permite ca porțiunea specifică a ADN (care este orice genă de interes) să fie rapid reprodusă in vitro de peste 200.000 de ori. Pentru a realiza reacția, este suficient să existe materialul ADN al unei celule; cantitatea de ADN amplificată prin PCR este atât de mare încât acest ADN poate fi pur și simplu colorat (utilizând sonde radioactive după ce nu este necesară electroforeza). O condiție prealabilă pentru efectuarea PCR este cunoașterea secvenței nucleotidice a regiunii ADN amplificate pentru selectarea corectă a primerilor sintetizați artificial.
In prezent, PCR este un proces care are loc într-un singur tub și constând din cicluri repetitive de amplificare (reproducere, copie) ale secvențelor ADN specifice, în scopul de a obține un număr suficient de mare de copii care pot fi identificate prin electroforeză. O componentă esențială a reacției - „grunduri“ - oligonucleotide sintetice care constau din 20-30 baze de „Site-uri“ complementare (zone) de maleabilizare (conectare) la porțiunea identificabilă a ADN-ului șablon.
PCR continuă automat într-un termostat programabil - termociclu (termociclu). Ciclul în trei etape, ca rezultat al obținerii copiilor exacte a porțiunii identificabile a ADN-ului șablon, se repetă de 30-50 de ori, în conformitate cu programul prestabilit al termociclului. În primul ciclu, oligopramii hibridizează cu ADN-ul șablonului original și apoi (în cicluri ulterioare) și cu moleculele de ADN nou sintetizate pe măsură ce se acumulează în amestecul de reacție. În cel de-al doilea caz, sinteza ADN nu se termină datorită unei modificări a regimului de temperatură, ci la atingerea limitei ADN polimerazei regiunii amplificate, care determină dimensiunea regiunii ADN nou sintetizată la o nucleotidă.
Ca metodă de detectare a moleculelor de ADN obținute, este utilizată electroforeza, prin care materialul amplificat este împărțit în funcție de mărimea ampliconilor (produse de amplificare).
Cu ajutorul PCR, este posibilă investigarea directă a locurilor de localizare a mutațiilor suspecte sau a siturilor polimorfe și, de asemenea, studierea prezenței oricărei alte caracteristici specifice a ADN-ului.
[