Expert medical al articolului
Noile publicații
PCR ca metodă de diagnosticare a bolilor genetice
Ultima examinare: 04.07.2025
Tot conținutul iLive este revizuit din punct de vedere medical sau verificat pentru a vă asigura cât mai multă precizie de fapt.
Avem linii directoare de aprovizionare stricte și legătura numai cu site-uri cu reputație media, instituții de cercetare academică și, ori de câte ori este posibil, studii medicale revizuite de experți. Rețineți că numerele din paranteze ([1], [2], etc.) sunt link-uri clickabile la aceste studii.
Dacă considerați că oricare dintre conținuturile noastre este inexactă, depășită sau îndoielnică, selectați-o și apăsați pe Ctrl + Enter.
PCR este o nouă realizare a geneticii moleculare, utilizată pentru amplificarea ADN-ului și permite multiplicarea rapidă in vitro a unei regiuni specifice a ADN-ului (adică a oricărei gene de interes) de peste 200.000 de ori. Pentru a efectua reacția, este suficient să existe material ADN dintr-o singură celulă; cantitatea de ADN amplificată prin PCR este atât de mare încât acest ADN poate fi pur și simplu colorat (nu este necesară utilizarea sondelor radioactive după electroforeză). O condiție prealabilă pentru efectuarea PCR este cunoașterea secvenței nucleotidice a regiunii ADN amplificate pentru selecția corectă a primerilor sintetizați artificial.
În prezent, PCR este un proces cu un singur tub, constând în cicluri repetate de amplificare (reproducere, copiere) a unei secvențe specifice a moleculei de ADN, pentru a obține un număr suficient de mare de copii care pot fi identificate prin electroforeză. Una dintre componentele cheie ale reacției sunt „primerii” - oligonucleotidele sintetice constând din 20-30 de baze complementare „situsurilor” (zonelor) de recoacere (atașare) de pe zona identificată a ADN-ului matriceal.
PCR are loc automat într-un termostat programabil - un termociclator (amplificator). Ciclul în trei etape, care are ca rezultat copii exacte ale secțiunii identificate de ADN matriceal, se repetă de 30-50 de ori, în conformitate cu programul specificat al termociclatorului. În primul ciclu, oligoprimerii hibridizează cu ADN-ul matriceal original, iar apoi (în ciclurile ulterioare) cu moleculele de ADN nou sintetizate, pe măsură ce se acumulează în amestecul de reacție. În acest ultim caz, sinteza ADN-ului se termină nu ca urmare a unei schimbări de temperatură, ci la atingerea limitei ADN polimerazei secțiunii amplificate, ceea ce determină dimensiunea secțiunii de ADN nou sintetizate cu o precizie de un nucleotid.
Electroforeza este utilizată ca metodă de detectare a moleculelor de ADN obținute, cu ajutorul căreia materialul amplificat este separat în funcție de dimensiunea ampliconilor (produși de amplificare).
PCR poate fi utilizat pentru a examina direct locațiile mutațiilor suspectate sau ale situsurilor polimorfice, precum și pentru a studia prezența oricăror alte caracteristici specifice ale ADN-ului.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]