Vitamina A în sânge

Valorile de referință (normale) nivelurile de vitamina A (retinol) în serul sanguin: copii 1-6 ani - 0,7-1,5 mol / L, 7-12 - 0,91-1,71 mmol / l, 13 -19 ani - 0,91-2,51 μmol / l; la adulți este de 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamina A se referă la liposolubili și există în două forme - vitamina A sau retinol (găsit numai în produsele de origine animală) și pro-vitamina A, cunoscut sub numele de caroten real (preparat din origine animală sau vegetală), care poate fi transformat în retinol în pereți tractul digestiv. Aproximativ 50-90% din retinol administrat împreună cu alimentele este absorbit în intestinul subțire și transportat în complexul legat de chilomicroni la ficat, unde este depozitat sub formă de palmitat de retinol. Dacă este necesar, se eliberează în sânge sub formă de retinol, care este în combinație cu proteina care leagă vitamina A. În ser, proteina care leagă vitamina A + complexul retinol se leagă de transtiretin. Din ser, retinolul este capturat de celulele țintă, cum ar fi fotoreceptorii retinieni și epiteliul.

Când corpul de vitamina A într-o cantitate mai mare decât cerințele (180-430 micrograme retinol pe zi, în funcție de vârsta, sexul și starea fiziologică), excesul în ficat sunt depozitate formând depou acestei vitamine. Cu un aport redus de retinol din alimente, depozitele sale hepatice sunt eliberate în sânge, menținând concentrația de retinol în ser la un nivel normal (peste 0,7 μmol / L). Alte forme biologic active ale vitaminei A (retină și acid retinoic) sunt prezente în sânge în concentrații foarte scăzute (sub 0,35 μmol / L); pe esterii retinolului reprezintă aproximativ 5% din totalul vitaminei A (0,1-0,1 μmol / l).

Vitamina A are un rol important în procesele de reducere a oxidării. Retinolul promovează formarea de glicogen în ficat și mușchi, promovează creșterea colesterolului în sânge, participă la sinteza steroidului și a hormonilor sexuali. Este necesară pentru creșterea și formarea de os schelet resinteza rodopsinei, și, de asemenea, contribuie la funcționarea normală a membranelor mucoase și a epiteliului de acoperire a pielii, prevenind metaplazie sale, hiperkeratoza și descuamarea excesivă. Vitamina A contribuie la întărirea părului, a dinților și a gingiilor. In ultimii ani, arată rolul variat de vitamina A în prevenirea cancerului și reglarea imunității (esențială pentru finalizarea fagocitozei, crește sinteza Ig, stimulează producerea de celule T killer, stimulează tipul T-helper II și colab.). Vitamina A - un antioxidant activ, care acționează în principal în prezența vitaminei E; protejează vitamina C de oxidare. Deficitul de vitamina A este considerat un factor de risc pentru neoplasmele maligne. În studiile experimentale sa arătat că o creștere a conținutului de vitamină A în dietă mărește durata mediană a vieții cu 17,5%. Zincul este un cofactor esențial al metabolismului vitaminei A (necesar pentru sinteza proteinei care leagă vitamina A).

Condiția medie zilnică pentru retinol pentru adulți (20-50 ani) este de 1,2 mg (4000 UI, 1 UI echivalent cu 0,3 μg retinol), pentru femeile gravide - 1,5 mg (5000 UI), pentru alăptare - 1, 8 mg (6000 UI), pentru persoanele peste 60 de ani - 2,5 mg (10 000 UI). Cel puțin o treime din necesarul zilnic de retinol trebuie transmis organismului în formă gata preparată; restul poate fi absorbit prin utilizarea carotenoidelor, din care se formează retinol în organism. Trebuie avut în vedere că aproximativ 30% din retinol din alimente este distrus prin tratamentul termic. Activitatea retinolului este de 2 ori mai mare decât carotenul, în plus, acesta din urmă este absorbit în intestin doar între 30-40%. Prin urmare, la evaluarea aportului dietetic, se consideră că 1 mg de retinol corespunde aproximativ la 6 mg de carotenoizi.

Determinarea retinolului (vitamina A) și a carotenoidelor în ser în conformitate cu Bessey în modificarea LA Anisimova

Principiul metodei

Determinarea vitaminei A și a carotenoidelor se bazează pe hidroliza lor într-o soluție de alcool alcalin, urmată de extracția cu un amestec de solvenți organici.

Reactivii

• Soluție de hidroxid de potasiu (KOH) de 11 M.
• 96% alcool etilic.
• 1 M soluție de hidroxid de potasiu (KOH) în 96% alcool etilic: 1 volum de soluție KOH de 11 M este amestecat cu 10 volume de alcool etilic 96%. Reactivul este preparat în ziua studiului. Dacă în timpul amestecării apare colorarea, alcoolul trebuie curățat prin distilare înainte de utilizare.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Amestec de xilen-octan: preparat prin amestecarea unor volume egale de xilen și octan.

Investigațiile se efectuează pe un spectrofotometru.

Cursul determinării vitaminei A

Sângele luat de pe deget (aproximativ 1 ml) se adaugă la eticheta centrifugă și se pune într-o ceașcă de sticlă cu apă caldă (temperatura 40-45 ° C) timp de 20-30 minute. Pentru a separa serul, un cheag de sânge este înfășurat cu atenție în jurul marginii tubului cu o tijă de sticlă subțire și centrifugat la 3000 rpm timp de 10 minute.

Selectați 0,12 ml ser și transferați-l într-un tub de aglutinare, apoi adăugați 0,12 ml dintr-o soluție de hidroxid de potasiu 1 M alcool. Conținutul este agitat bine.

Tuburile de testare cu sonde sunt plasate într-o baie de apă timp de 20 minute la o temperatură de 60 ° C pentru hidroliză.

Probele sunt răcite și se adaugă 0,12 ml dintr-un amestec de xilen-octan, agitat viguros timp de 10-15 secunde. Se răcește din nou și se centrifughează.

Îndepărtați cu atenție stratul superior care conține vitamina A și carotenoide cu o pipetă Pasteur cu o cutie de cauciuc și transferați-o în microcuvette.

Probele sunt spectrofotometrice la o lungime de undă de 328 nm - pentru a determina vitamina A și la o lungime de undă de 460 nm - pentru a determina carotenoidele.

După spectrofotometria eșantionul studiat este supus la radiații ultraviolete pentru distrugerea de vitamina A. In acest scop, la o distanță de 15-20 cm de microcuve cuarț set (bactericid), lampa, astfel încât iradierea expusă porțiunea cuvetei, umplută cu lichid; timpul de iradiere este de 45-60 de minute.

Probele sunt repetat spectrofotometrice la o lungime de undă de 328 nm. Conținutul de vitamină A este determinat din diferența de valori de extincție (densitatea optică), ținând seama de coeficientul (factorul) 637, calculat de Bessey pentru vitamina A.

Calculul se efectuează conform formulei:

X = 637 × (E328 (1) - E328 (2)),

Unde X este conținutul de vitamină A, μg / dL; 637 este coeficientul calculat de Bessey pentru determinarea vitaminei A; Е328 (1) - densitatea optică a soluției înainte de iradiere; E328 (2) este densitatea optică a soluției după iradiere.

Coeficientul pentru transferul concentrației de vitamină A din μg / dl în μmol / l este 0,035.

Conținutul de carotenoizi se calculează prin formula:

X = 480-Е480,

Unde X este conținutul de carotenoizi, μg / dl; 480 este coeficientul calculat de Bessey pentru a determina carotenoidele; E480 este densitatea optică a soluției de testare.

Remarcă

Potrivit Bessey, în cercetare poate avea un volum mai mare sau mai mic de ser, dar raportul său la volumul soluției de alcool trebuie să fie constantă pentru orice modificare a volumului (cantitatea) amestec octanoic-xilen.

Norma în conținutul de vitamină A din serul de sânge este: la nou-născuți și sugari - 160-270 μg / l; la adulți, 1,05-2,45 pmol / l (300-700 pg / l). Conținutul de carotenoizi din serul adult este de 800-2300 μg / l.