Karyotyping

Pentru studiul cromozomilor sunt adesea folosite culturi de sânge pe termen scurt, precum și celule de măduvă osoasă și culturi fibroblaste. Sângele livrat în laborator cu anticoagulant este supus centrifugării pentru precipitarea celulelor roșii din sânge și leucocitele sunt incubate în mediul de cultură timp de 2-3 zile. Phytohemaglutinina se adaugă la proba de sânge, deoarece accelerează aglutinarea eritrocitelor și stimulează divizarea limfocitelor. Faza cea mai potrivită pentru studiul cromozomilor este metafaza mitozei, astfel încât colchicina este utilizată pentru a opri divizarea limfocitelor în această etapă. Adăugarea acestui medicament în cultură conduce la o creștere a proporției de celule care sunt în metafază, adică în stadiul ciclului celular, când cromozomii sunt cel mai bine văzuți. Fiecare cromozom replică (produce o copie proprie) și după o colorare corespunzătoare este vizibilă sub forma a două cromatide atașate la centromere sau constricție centrală. Celulele sunt apoi tratate cu o soluție hipotonică de clorură de sodiu, fixată și colorată.

Pentru colorarea cromozomilor, colorantul Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomină sau 2% acetazarină sunt mai des folosite. Ei pătrund în întregime cromozomii, uniform (metoda de rutină) și pot fi utilizați pentru a identifica anomaliile numerice ale cromozomilor umane.

Pentru a obține o imagine detaliată a structurii cromozomilor, identificarea (identificarea) cromozomilor individuali sau a segmentelor acestora, se utilizează diferite metode de colorare diferențială. Metodele cele mai frecvent utilizate sunt Giemsa, precum și G-și Q-îndoire. O examinare microscopică a medicamentului de-a lungul lungimii cromozomului dezvăluie o serie de benzi colorate (heterochromatin) și nevopsite (eucromatin). Caracterul strieniei transversale obținut în acest caz permite identificarea fiecărui cromozom din set, deoarece alternanța dungilor și dimensiunile lor sunt strict individuale și constante pentru fiecare pereche.

Plăcile metafazice ale celulelor individuale sunt fotografiate. Cromozomii individuali sunt tăiați din fotografii și lipiți pe foaia de hârtie în ordine; o astfel de imagine a cromozomilor se numește un cariotip.

Utilizarea de colorare suplimentară, precum și noile metode de obținere a preparatelor cromozomiale, care permit întinderea cromozomilor în lungime, măresc semnificativ precizia diagnosticului citogenetic.

O nomenclatură specială a fost dezvoltată pentru a descrie cariotipul uman. Cariotipul normal al unui bărbat și al unei femei este desemnat ca 46, XY și 46, respectiv XX. În sindromul Down, caracterizat prin prezența unui cromozom suplimentar 21 (trisomia 21), cariotipul femeilor este descris ca 47, XX 21+, iar bărbații - 47, XY, 21+. În prezența unei anomalii structurale a cromozomului, este necesar să se indice un braț lung sau scurt modificat: litera p reprezintă un braț scurt, q un braț lung și o translocație. Astfel, atunci când bratul scurt al cromozomului 5 (sindromul "scânteie pisică") este șters, cariotipul feminin este descris ca 46, XX, 5p-. Mama unui copil cu translocație Sindromul Down - un purtător cu o translocație echilibrată de 14/21 are un cariotip de 45, XX, t (14q, 21q). Cromozomul de translocație se formează atunci când brațele lungi ale cromozomilor 14 și 21 se îmbină, umerii scurți se pierd.

Fiecare umăr este împărțit în cartiere, iar pe rând - în segmente, iar cele și altele sunt desemnate prin cifre arabe. Centromerele cromozomului reprezintă punctul de plecare pentru numărarea regiunilor și segmentelor.

Astfel, pentru topografia cromozomilor se folosesc patru markeri: numărul cromozomilor, simbolul umărului, numărul raioanelor și numărul de segment în regiunea dată. De exemplu, 6p21.3 de înregistrare înseamnă că vorbim despre pereche sasea de cromozomi, brațul său scurt, zona 21, segmentul 3. Există mai multe caractere opționale, în special PTER - capătul brațului scurt, qter - capătul brațului lung.

Metoda de cercetare citogenetică permite detectarea ștergerilor și a altor modificări ale cromozomilor numai în mărimea de aproximativ 1 milion de baze (nucleotide).

[1], [2], [3], [4]