Virusul hepatitei A

Hepatita virală A este o boală infecțioasă umană caracterizată printr-o afectare hepatică predominantă și manifestă intoxicație clinică și icter. Virusul hepatitei A a fost detectat în 1973 de către S. Feinstone (și alții) folosind metoda microscopiei electronice electronice și prin infectarea maimuțelor - cimpanzeilor și marmoseturilor. Esența metodei de microscopie electronică electronică este aceea că anticorpii specifici (ser de convalescență) sunt adăugați la filtratul fecalelor pacientului cu hepatita A și precipitatul este supus microscopiei electronice. Datorită interacțiunii dintre virusuri și anticorpi specifici, aceștia suferă o agregare specifică. În acest caz, acestea sunt mai ușor de detectat, iar agregarea sub influența anticorpilor confirmă specificitatea agentului patogen. Descoperirea lui S. Feinstone a fost confirmată în experimente pe voluntari.

Virusul hepatitei A are o formă sferică, diametrul virionului este de 27 nm. Genomul este reprezentat de un ARN pozitiv monocatenar cu o masă de 2,6 MD. Supercapsid este absent. Tipul de simetrie este cubic - icosaedron. Capsida are 32 capsomeri, este formată din patru polipeptide (VP1-VP4). Prin proprietățile sale, virusul hepatitei A aparține genului Heparnovirus, familia Picornaviridae. Antigen, virusul hepatitei A (HAV - virusul hepatitei A) este omogen. HAV se înmulțește bine în corpul cimpanzei, babuinilor, hamadrililor și maimuțelor de joc (marmosete). De mult timp, virusul nu putea să se cultive. Numai în anii 1980. A fost posibil să se obțină culturi celulare în care se propagă HAV. Utilizat inițial pentru aceste scopuri, imortalizată linie de celule de rinichi de embrion de macac rhesus (cultura FRhK-4), iar acum - linie transplantat celule de rinichi de maimuță verde (Cultura 4647).

Conform recomandărilor experților OMS, a adoptat următoarea nomenclatura hepatitei A markeri virus: Virusul hepatitei A - anticorpii NAU la virusul hepatitei A: anti-HAV IgM și IgG anti-VHA.

HAV este particule mici, cu un diametru de 27-30 nm, având simetrie icosahedral și având o omogenitate. Pe modelul de difracție electronică obținut prin metoda agregării imune, sunt detectate particule densă de electroni cu capsomeri aranjați simetric situați superficial. Cu contrast negativ, particulele complete și cele goale sunt detectate în preparate. Nucleocapsid NAV, spre deosebire de cel al gripei, nu are proeminențe și membrane de suprafață. De asemenea, este important ca virionul HAV să nu aibă o structură în formă de inimă.

Conform proprietăților sale fizico-chimice ale virusului hepatitei A este legat de familia Picornaviridae, genul enterovirus cu numărul atomic 72. Cu toate acestea, această taxonomie a fost prea neobișnuită, iar OMS a constatat că este posibil să părăsească „virusul hepatitei A“ terminologie.

Ca toate virusurile din familia Picornaviridae, virusul hepatitei A conține acid ribonucleic. Unele laboratoare au demonstrat posibilitatea clonării genomului virusului hepatitei A, care deschide perspectiva de a obține preparate vaccinale.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Rezistența virusului hepatitei A

Virusul este relativ rezistent la temperaturi ridicate, acizi, solvenți de grăsime (nu există lipide), dezinfectanți, tolerează o temperatură scăzută. Toate acestea contribuie la conservarea pe termen lung în mediul extern. La temperatura camerei, supraviețuiește timp de câteva săptămâni, la 60 ° C, pierde parțial infecțiozitatea după 4-12 ore, complet - după câteva minute la 85 ° C. Foarte rezistent la clor, datorită căruia este capabil să pătrundă în apa de la robinet prin barierele instalațiilor de tratare a apei.

Rezumând toate datele, putem caracteriza virusul hepatitei A după cum urmează:

• stăpânul natural este om;
• animale experimentale - marmozet, cimpanzeu;
• sursă de infecție - fecale;
• boală - epidemie și endemică;
• traseul de transmisie este fecal-oral;
• perioada de incubație - 14-40 de zile;
• trecerea la hepatită cronică - nu este remarcat.

Proprietățile imunologice ale NAV sunt următoarele:

• Prototype tulpini - Ms-1, CR-326, GVG. Toate sunt similare din punct de vedere imunologic sau identice;
• Anticorpii - IgM și IgG, sunt produși ca răspuns la introducerea proteinelor structurale ale virusului și sunt protectori;
• I Acțiunea trofică a globulelor serice umane - protejează sau atenuează boala în starea de administrare înainte de infecție sau în timpul perioadei de incubație.

Caracteristicile fizico-chimice ale NAU sunt următoarele:

• Morfologia este o particulă sferică fără coajă cu simetrie cubică, capsida constă din 32 capsomeri;
• Diametrul este de 27-30 nm;
• Densitatea în CsCl (g / cm3) este 1,38-1,46 (particule deschise), 1,33-1,34 (virion matur), 1,29-1,31 (virioni imature, particule goale);
• Coeficientul de sedimentare este de 156-160 virioni maturi;
• Acid nucleic - ARN liniar monocatenar;
• Greutate moleculară relativă - 2,25 106-2,8 106KD;
• Numărul de nucleotide este de 6.500-8.100.

Stabilitatea NAV în efectele fizico-chimice este după cum urmează:

• Cloroformul, eterul - este stabil;
• Clor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - inactivare parțială;
• Cloramină, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - inactivare completă;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 de ore - inactivare completă, 1: 350, 20 ° C, 60 min - inactivare parțială.

Temperatura:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° С, 30 de minute - este stabil;
• 60 ° С, 12 ore - inactivare parțială;
• 85 ° С, 1 min - inactivare completă;
• Autoclavare, 120 ° C. 20 de minute - inactivare completă;
• Încălzire uscată, 180 ° C, 1 h - inactivare completă;
• UV, 1,1 W, 1 min - inactivare completă.

Datele prezentate arată că proprietățile fizico-chimice ale virusului hepatitei A sunt cele mai apropiate de enterovirusurile. Ca și alte enterovirusuri, HAV este rezistent la multe soluții dezinfectante, complet inactivat pentru câteva minute la 85 ° C și autoclavat.

Se demonstrează că virusul hepatitei A poate fi reprodus în linii de cultură monostrat primar și transplant, de celule umane și de maimuțe. Se observă o reproducere activă în special a virusului hepatitei A în culturi in vitro atunci când se utilizează ca materie primă extracte de ficat de la maimuțe. Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că în toate experimentele în conformitate cu o reproducere a virusului hepatitei A în culturi in vitro remarcat lungă perioadă de incubație în pasajele primare (-10 până la 4 săptămâni), ulterior acumularea virale creșteri semnificative genetice, dar valorile absolute sunt foarte nesemnificativă, ceea ce dă motivul pentru mulți cercetători de a vorbi despre replicarea incompletă a virusului hepatitei A în culturile țesuturilor.

Rezumând datele din literatura de specialitate privind reproducerea virusului hepatitei A din culturi non-rădăcinoase, se poate spune că faptul că o experiență prelungită a HAV in vitro este incontestabilă. Condițiile optime pentru un nivel ridicat ridicat de replicare virală nu au fost identificate în cele din urmă, ceea ce constrânge studiul proprietăților sale biologice, producția unei surse de reactivi pentru producerea de diagnostice și proiectarea vaccinurilor.

În același timp, judecățile mai optimiste despre această problemă pot fi găsite în literatură. Soluționarea tuturor problemelor legate de cultivarea virusului hepatitei A este o problemă pentru viitorul apropiat. Studiind condițiile optime VHA propagarea in culturi de celule de rinichi embrionar maimuțe rhesus relevat două faze: faza de producere a virusului infecțios (pana la 6-8 zile, la trecerea a 5) și faza acumulării intensive a antigenului viral. Se arată, de asemenea, că acumularea cea mai semnificativă a antigenului viral are loc în condițiile așa-numitei cultivări a rolelor (sticle rotative). Astfel se deschid posibilități largi de obținere a unui antigen cultural în cantități mari și, prin urmare, va apărea un material de pornire pentru prepararea sistemelor de diagnosticare și fabricarea preparatelor vaccinale.

Epidemiologia hepatitei A

Virusul hepatitei A are o mare patogenitate pentru oameni. Conform concluziilor OMS (1987), pentru debutul bolii, este suficient să infectăm doar un virion. Cu toate acestea, doza practică infecțioasă este probabil mult mai mare. Sursa infecției este doar o persoană infectată. Virusul este eliberat în cantități mari cu fecale cu 12-14 zile înainte de apariția icterului și în decurs de 3 săptămâni. Perioada icterică. Diferențe semnificative în izolarea agentului patogen la pacienții cu forme icterice, icterice și asimptomatice de hepatită A nu au fost identificate. Metoda de infectare este fecal-orală, în principal apoasă și, de asemenea, pe rutele de uz casnic și alimentar. Metoda de infectare este fecal-orală, în principal apoasă și, de asemenea, pe rutele de uz casnic și alimentar. Calea principală (primară) de transmitere a virusului este apa. Este, de asemenea, posibilă infectarea cu aer. Sensibilitatea populației este universală. Majoritatea copiilor sub vârsta de 14 ani sunt bolnavi. Boala are o sezonitate pronunțată de toamnă-iarnă.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Simptomele hepatitei A

Perioada de incubație variază de la 15 la 50 de zile, care depinde de cantitatea de doză infectantă a virusului, dar în medie este de 28-30 de zile. Odată ajuns în corp, virusul hepatitei A se replica in ganglionii limfatici regionali, în sânge și apoi la celulele hepatice și provoacă hepatită acută difuză, care este însoțită de leziuni ale hepatocitelor hepatice și celule reticuloendoteliale și o scădere a funcțiilor sale de detoxifiere și barieră. Deteriorarea hepatocitelor nu apare datorită acțiunii directe a virusului, ci ca urmare a mecanismelor imunopatologice. Imaginea cea mai tipică a hepatitei A este forma acuta icterica ciclică: perioada incubație, prodromal (preicteric), icter și perioada de convalescență. Cu toate acestea, în focarele de infecție relevă un număr mare de pacienți cu forme asimptomatice și anicteric de infecție, al căror număr predomină peste icterica ( „fenomen iceberg“).

Imunitatea post-infecțioasă este puternică și de lungă durată, cauzată de anticorpi neutralizanți ai virusului și celule de memorie imună.

Diagnosticul microbiologic al hepatitei A

Diagnosticarea hepatitei A ( cu excepția animalelor infecție - cimpanzei marmozet, babuini, pe care le - am) , bazate pe diverse metode imunologice: metoda imunofluorescentă DGC, hemaglutinarea adeziune imună (complex de antigen viral + anticorp în prezența complementului adsorbite pe eritrocite și determină adeziunea lor) . Cu toate acestea, aplicabilitatea acestor metode este limitată din cauza lipsei de antigene virale specifice și reacția de imunofluorescență necesita biopsii hepatice, ceea ce nu este de dorit. Metodă fiabilă și specifică este imun microscopie electronica, dar este foarte consumatoare de timp. Prin urmare, până singura metodă acceptabilă pentru reacția imunologică este testul immunosorbent în fază solidă sub formă de IPM, sau RIM, in special in modificarea „captare“ imunoglobulină M. În țara noastră , în acest scop propus sistem de testare - „DIAG-A-GEO“. Principiul de funcționare al acestui sistem de testare este după cum urmează. Pe pereții din polistiren lunochek sorbită primii anticorpi la imunoglobuline de clasa M (antiimmunoglobuliny M) este apoi adăugat în serul pacientului investigat. Dacă există clasa de anticorpi IgM, acestea se vor lega la un anticorp-Ti-M, apoi se adaugă la un anumit antigen viral (virusul hepatitei A), care se obține prin creșterea în culturi celulare. Sistemul este clătit, iar la acesta se adaugă anticorpi antivirali marcați cu peroxidază de hrean. În cazul în care a existat o interacțiune dintre toate cele patru componente ale sistemului, există patru straturi „sandwich“:

• antiimmunoglobuline M,
• imunoglobuline M (împotriva virusului hepatitei A - în serul de test al pacientului);
• virusul viral,
• anticorpii antivirus marcați cu o enzimă.

Pentru a detecta acest complex, un substrat pentru enzimă este adăugat la lunete. Sub influența enzimei, este distrusă și se formează un produs colorat. Intensitatea culorii poate fi măsurată cantitativ cu ajutorul unui spectrofotometru sau fotocolorimetru.

Avantajul metodei de captare a IgM este acela că anticorpii din această clasă de imunoglobuline apar la răspunsul imun primar și indică o etapă activă de infecție, dispărând după boala transferată . Anticorpii antivirus aparținând clasei de IgG, în contrast, persistă mult timp după boală, furnizând imunitatea dobândită. Pentru detectarea virusului hepatitei A, a fost propusă o metodă de sondare a ADN-ului: un ARN complementar este utilizat ca sondă ADN.

Tratamentul hepatitei A

Datorită faptului că producția de interferon este perturbată în hepatitele virale, tratamentul hepatitei A se bazează pe utilizarea interferonului și a inductorului sintezei endogene amixin.

Prevenirea specifică a hepatitei A

Hepatita seroprevention anterior aplicat pe scară largă A folosind gammaglobulin nu era justificată, însă, accentul a fost pus pe imunizarea exploatație efectuat vaccinarea împotriva hepatitei A. În acest scop, se dezvoltă și se utilizează deja diferite variante de vaccinuri. În Rusia, un vaccin eficient împotriva hepatitei A a fost obținut în 1995, iar acum a fost aplicat cu succes.