Imunofenotiparea hemoblastozei

Progrese semnificative în studiile hematologice asociate în ultimii ani, cu utilizarea metodelor imunologice moderne și instrumente automate pentru analizarea și sortarea celulelor de sânge periferic și măduvei osoase - citometrele. Morfologică tradițională și studiul citochimic al bolii de celule substrat (sânge, măduva roșie osoasă, ganglionii limfatici, splina, etc.), în multe cazuri, în special în boli limfoproliferative, nu dezvăluie întreaga varietate de opțiuni, printre forme morfologic similare și de a identifica originea clonei patologice . Aceste probleme pot fi rezolvate numai prin studierea caracteristicilor imunologice ale celulelor. Fiecare etapă a diferențierii celulelor hematopoietice are propriul set de antigene care sunt pe clasificarea internațională cunoscută sub numele de diferențiere și diferențierea sunt împărțite în grupuri, CD-uri desemnate.

La diferențierea bloc a modificărilor neoplazice pot apărea în orice stadiu de dezvoltare de celule normale, rezultând într-o clonă de celule patologice definind boala substrat și având caracteristica aceeași imunologic (sau fenotipica). După un studiu al acestor markeri în celulele pot fi determinate prin orice formă sau variantă de realizare a bolii sunt coerente, adică pe baza diagnosticului diferențial fenotipul celulei imunologică, care este cel mai dificil în tulburări limfoproliferative, deoarece substratul celular principal bolile patologice sunt aproape același tip de celule morfologic.

Fenotiparea permite introducerea în celulele sanguine de sânge și mature a seriei mielo-, mono- și limfocitare cu ajutorul anticorpilor monoclonali prin prezența antigenilor de diferențiere (receptori) în peretele celular. În secțiunea "Evaluarea statutului imunitar al organismului", caracteristicile și semnificația diagnostică a markerilor celulari sunt descrise parțial; Mai jos este o scurtă descriere a markerilor celulelor antigenice aplicate pentru diagnosticul de hemoblastoză. Pe membranele celulelor sanguine și ale măduvei osoase roșii, pot fi identificați următorii antigeni (markeri).

• CD2 este o glicoproteină transmembranară monomerică. Este prezent pe suprafața tuturor limfocitelor T circulante și a unor limfocite NK. CD2 participă la procesul de activare alternativă a limfocitelor T. Detectarea CD2 utilizând anticorpi monoclonali în practica clinică este utilizată pentru fenotiparea leucemiilor acute de celule T, a limfoamelor, a condițiilor inflamatorii cronice și a imunodeficienței.
• CD3 - un complex proteic asociat cu un receptor de celule T specifice antigenului, este principalul marker funcțional al limfocitelor T. Facilitează transferul semnalului de activare din membrană în citoplasma celulei. Detectarea CD3 este indicată pentru diagnosticarea leucemiei acute a celulelor T, a limfomului (CD3 nu este exprimată în tumorile limfoide non-T-celule) și a bolilor de imunodeficiență.
• CD4 este o glicoproteină transmembranară exprimată printr-o subpopulație de T-ajutători (inductori) care constituie 45% din limfocitele din sângele periferic. În stadiile incipiente ale dezvoltării limfocitelor în timus, antigenele CD4, precum și CD8, sunt exprimate prin toate limfocitele corticale. Afecțiunile thymocyte medulare, ale căror fenotipuri sunt similare celulelor T CD4 + mature ale sângelui periferic (ajutoarele T), exprimă deja fie receptorii CD4, fie CD8. În sângele periferic, până la 5% dintre celule sunt marcate simultan CD4 și CD8. O ușoară exprimare a CD4 este posibilă pe unele celule monocitare. CD4 este exprimat în majoritatea cazurilor de limfoame cu celule T, incluzând micoza din ciuperci, precum și leucemia cu celule T asociată cu HTLV (virusul T-limfotropic uman HTLV).
• CD5 - o glicoproteină cu un singur lanț, prezentă pe toate limfocitele T mature și cele mai multe timocite, este slab exprimată prin limfocitele B. CD5 este detectat pe celulele neoplazice ale leucemiei limfocitare cronice de celule B și ale limfomului centro-ciclic. În alte tipuri de boli limfoide maligne - limfom folicular, leucemie de celule păroase, limfom de celule mari - CD5 nu este exprimată.
• CD7 este o proteină mono-catenară, cel mai vechi marker al diferențierii celulelor T. Se exprimă prin limfocite pro-T chiar înainte de a migra spre timus. CD7 este detectat pe majoritatea celulelor NK, se observă o exprimare slabă pe monocite. B limfocitele și granulocitele nu conțin acest antigen. Definiția CD7 este utilizată pentru diagnosticarea limfoamelor, leucemiei limfoblastice limfoblastice pentru copii.
• CD8 este o proteină constând din două lanțuri polipeptidice legate prin punți disulfidice. Se exprimă printr-o subpopulație a limfocitelor T citotoxice și supresoare, care cuprind 20-35% din limfocitele din sângele periferic. Acest antigen are, de asemenea, limfocite NK, timocite corticale, 30% timocite medulare și o subpopulație de celule roșii de măduvă osoasă. CD8 este examinat pentru evaluarea cantitativă a conținutului de supresoare T (vezi secțiunea "T-limfocite-supresoare în sânge" de mai sus).

• CD10 este endopeptidaza asociată cu membrana celulară. CD10 exprimă forme tinere de limfocite B și o subpopulație de limfocite corticale. CD10 exprimă toate celulele ALL.
• CD11c exprimă macrofagele, monocitele, granulocitele, celulele NK și celulele leucemice ale celulelor păroase pe membrana celulară.
• CD13 este o glicoproteină exprimată prin celule mielomonocitare (celule progenitoare, neutrofile, bazofile, eozinofile, monocite și celule leucemice mieloide). Este absent în limfocitele T și B, eritrocitele și trombocitele.
• CD14 este o glicoproteină de membrană de suprafață. Este exprimată în principal de monocite și macrofage. CD14 este detectat în mai mult de 95% monocite din sângele periferic și din măduva osoasă. Expresia puternică a CD14 este observată în leucemia mieloblastică acută. În leucemia limfoblastică acută și cronică, acest antigen nu este exprimat.
• CD15 este o oligozaharidă. Participă la procesele de fagocitoză și chemotaxie. Acest antigen este prezent pe suprafața granulocitelor mature și a celulelor Berezovski-Sternberg. Exprimarea antigenului CD15 este detectată în boala lui Hodgkin. În limfoamele non-Hodgkin, CD15 nu este detectat în majoritatea cazurilor.
• CD16 este exprimat pe suprafața granulocitelor, monocitelor, macrofagelor și celulelor NK. Toate limfocitele care exprimă acest antigen au capacitatea de a determina citotoxicitatea celulară dependentă de anticorp. CD16 este determinat atunci când se introduc leucemii mielocitare cronice, pentru a caracteriza celulele NK.
• CD19 este o glicoproteină prezentă pe toate limfocitele B periferice, precum și pe toți precursorii celulelor B. Este absent la celulele plasmatice. Acesta este cel mai vechi marker al celulelor B, joacă un rol important în reglarea activării și proliferării limfocitelor B. CD19 este exprimat pe toate celulele neoplazice de leucemie acută de origine celulară B și este, de asemenea, prezent în unele forme de leucemie monoblastică acută.
• CD20 este o proteină non-glicozilată. În ontogeneza limfocitelor B, antigenul CD20 apare după CD19 în stadiul de diferențiere a celulelor pre-B a limfocitelor. Este absent pe membrana plasmatică a celulelor plasmatice. Este exprimată în ALL, leucemia limfocitară cronică a celulelor B, leucemia celulelor păroase, limfomul Burkitt și foarte rar în leucemia monoblastică acută.
• CD21 este o glicoproteină, într-o cantitate semnificativă este prezentă pe limfocitele B în organele limfoide și într-o cantitate mică pe celulele B ale sângelui periferic. CD21 este un receptor pentru virusul Epstein-Barr.
• CD22 este o proteină constând din două lanțuri de polipeptide. Se exprimă pe membrana majorității limfocitelor B, incluzând celule progenitoare (prolymphocytes). Antigenul nu este exprimat pe limfocitele B (celulele plasmatice) după activarea lor. Expresia cea mai pronunțată a CD22 este detectată pe celulele cu leucemie de celule păroase, slab - în leucemii mieloide și în celulă non-T.
• CD23 este o glicoproteină exprimată de limfocitele B activate ale sângelui periferic într-o măsură mult mai mare. CD23 mediază citotoxicitatea și fagocitoza dependentă de IgE prin macrofage și eozinofile.
• CD25 este o glicoproteină cu un singur lanț identificată ca un receptor cu afinitate scăzută pentru IL-2. Acest receptor este exprimat pe limfocite T activate și, la o densitate mai mică, pe celule B activate. În sângele periferic al persoanelor sănătoase, antigenul este prezent în mai mult de 5% din celulele limfoide.
• CD29 este un receptor de fibronectină. Este distribuită pe scară largă în țesuturi, este exprimată prin leucocite. Detectarea CD29 pe celulele sanguine periferice este folosită pentru a exemplifica o subpopulație a celulelor T având fenotipul CD4 + CD29 +, care se numește ajutor 2 de tip (Th2). Aceste celule, prin producerea de limfokine, participă la realizarea răspunsului imun humoral.
• CD33 este o glicoproteină transmembranară. Este prezentă pe suprafața celulelor seriei mieloide și monocitare. Se găsește pe suprafața monocitelor și, într-o măsură mai mică, a granulocitelor din sângele periferic. Aproximativ 30% din celulele măduvei osoase roșii exprimă CD33, incluzând mieloblastele, promileocitele și mielocitele. Antigenul lipsește pe membranele celulelor stem pluripotente. CD33 este utilizat pentru a caracteriza celulele în leucemiile mieloide. Celulele leucemice de origine limfoidă și eritroidă nu exprimă CD33.
• CD34 este o fosfoglicoproteină, exprimată prin celule progenitoare hematopoietice, incluzând celule stem monopote. Expresia cea mai pronunțată a lui Ar este observată la progenitori timpurii; când celulele mature, expresia markerului cade. CD34 se găsește, de asemenea, pe celulele endoteliale. CD34 este utilizat pentru a caracteriza celulele în leucemia acută mielogenă și limfoblastică. Cu leucemie limfocitară cronică și limfoame, expresia antigenului CD34 nu este detectată.

• CD41a este exprimată prin trombocite și megacariocite. Anticorpii monoclonali pentru detectarea CD41a sunt utilizați pentru a diagnostica leucemia megacariooblastică. Cu trombasthenia Glązmann, expresia acestui antigen este absentă sau suprimată în mod semnificativ.
• CD42b este o glicoproteină membranară formată din două lanțuri polipeptidice. Marcatorul se găsește pe suprafața trombocitelor și megacariocitelor. În practica clinică, detectarea CD42b este utilizată pentru a diagnostica trombocitopatia - sindromul Bernard-Soulier.
• CD45RA aparține grupei de glicoproteine transmembranare. Acesta este un antigen comun al leucocitelor. Se exprimă pe membrana celulară a limfocitelor B, într-o măsură mai mică a limfocitelor T și pe timocitele medulare mature. Marcatorul nu este exprimat prin granulocite.
• CD45RO este o izoformă cu greutate moleculară mică a CD45RA - un leucocite comun Ag. Ele se găsesc pe celule T (limfocite T de memorie), subpopulații ale limfocitelor B, monocitelor și macrofagelor. Anticorpii monoclonali la CD45RO interacționează cu majoritatea timocitelor, o subpopulație a limfocitelor T CD4 + CD8 + și a celulelor T activate mature. Celulele de origine mielomonocitară, granulocite și monocite poartă, de asemenea, acest antigen. Se detectează în limfoame centroblastice și imunoblaste.
• CD46 - dimerul O-glicozilat. Acesta este larg distribuit în țesuturi și exprimate T și B-limfocite, monocite, granulocite, celulelor NK, plachete, celule endoteliale, fibroblaste, dar este absent de pe suprafața eritrocitelor. CD46 asigură protecția tisulară din acțiunea complementului.
• CD61 este un antigen trombocitar. Se exprimă pe trombocite ale sângelui periferic și ale măduvei osoase roșii, precum și pe megacariocite și megacariooblaste. Definiția sa este utilizată ca marker pentru leucemia megakariooblastică acută. Exprimarea antigenului este absentă sau suprimată la pacienții cu trombastenă Glanzmann.
• CD95, denumit și Fas sau APO-1, este o glicoproteină transmembranară, un membru al familiei de receptori ai factorului de necroză tumorală. Se exprimă în cantități semnificative pe limfocitele T din sângele periferic (CD4 + și CD8 +) și, într-o măsură mai mică, pe limfocitele B și celulele NK. Acest antigen este de asemenea exprimat pe granulocite, monocite, celule tisulare și celule neoplazice. Legarea CD95 la ligandul Fas (CD95L) induce apoptoza în celule.
• CD95L sau ligand Fas, o proteină membranară aparținând familiei receptorilor de factor de necroză tumorală. Acest antigen este exprimat prin limfocite T citotoxice, celule NK și foarte des de celule tumorale; inductorul principal al apoptozei în celule.
• HLA-DR este un determinant monomorf al moleculelor de clasa II ale complexului principal de histocompatibilitate umană (HLA). Marker este exprimat pe celule Langerhans, celule dendritice ale organelor limfoide, și anumite tipuri de macrofage, limfocite B, celule T activate și celule epiteliale timice. Testul pentru acest marker este utilizat pentru a cuantifica limfocitele T activate cu fenotipul CD3 + HLA-DR +.

Folosind o selecție diferită de anticorpi monoclonali pentru markeri, este posibil să se facă un portret fenotipic al celulelor caracteristice unei forme date de leucemie.

Pe lângă folosirea tehnicilor imunofenotipării pentru diagnostic și diagnosticul diferențial de tumori maligne hematologice, deosebit de important transformat utilizarea lor în procesul de tratament pentru a evalua starea de remisie și populația reziduală a celulelor leucemice. Cunoașterea fenotipic „portret“ de celule blastice în perioada de diagnostic, a acestor markeri poate găsi celule clona leucemice în remisie, și de creșterea numărului acestora - pentru a prezice dezvoltarea de recidivă lungă (timp de 1-4 luni), până trăsăturile sale clinice și morfologice.

[1], [2], [3], [4],