Brucellae

Bruceloza este o boală infecțioasă unică a oamenilor și animalelor, cauzată de bacterii din genul Brucella. În Rusia, anual se înregistrează aproximativ 500 de cazuri primare de bruceloză la oameni.

Oamenii se infectează cu bruceloză în principal de la animalele domestice (ovine, caprine, vaci, porcine, reni - principalul rezervor al agentului patogen în natură). Bruceloza există de mult timp și a fost descrisă sub denumiri determinate de distribuția sa geografică (febră malteză, napolitană, gibraltar, mediteraneană).

Agentul patogen a fost descoperit în 1886 de D. Bruce, care l-a găsit într-un preparat din splina unui soldat care murise de febră malteză și l-a numit micrococul maltez - Micrococcus melitensis. S-a stabilit că principalii săi purtători sunt caprele și oile, iar infecția apare la consumul de lapte crud provenit de la acestea. În 1897, B. Bang și B. Stribolt au descoperit agentul patogen al avortului infecțios la vaci - Bacterium abortus bovis, iar în 1914, J. Traum a descoperit agentul patogen al avortului infecțios la porci - Brucella abortus suis. Un studiu comparativ al proprietăților Brucellae melitensis și Brucellae abortus bovis, realizat în 1916-1918 de A. Ivens, a arătat că acestea sunt aproape imposibil de distins unele de altele în multe privințe. În acest sens, s-a propus combinarea lor într-un singur grup, numit în onoarea lui Bruce - Brucella. În 1929, I. Heddleson a inclus Brucella abortus suis în acest grup și a propus împărțirea genului Brucella în 3 specii: Brucella melitensis (Micrococcus melitensis), Brucella abortus (Brucella abortus bovis) și Brucella suis (Brucella abortus suis).

Boala oamenilor și animalelor cauzată de brucele a fost denumită bruceloză. Ulterior, genul Brucella a fost completat cu încă trei specii: Brucella ovis a fost izolată de la berbeci care sufereau de epididimită (1953), Brucella neotomae - de la șobolani de tufiș (1957) și Brucella canis - de la câini de vânătoare (1966). Conform clasificării lui Bergey (2001), brucelele aparțin clasei Alphaproteobacteria.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ]

Morfologia Brucellei

Brucella are proprietăți morfologice, tinctoriale și culturale similare. Sunt celule cocoide gram-negative mici, cu diametrul de 0,5-0,7 μm și lungimea de 0,6-1,5 μm, situate aleatoriu, uneori în perechi, nu au flageli, nu formează spori și capsule. Conținutul de G+C în ADN este de 56-58% mol.

Proprietățile biochimice ale Brucellei

Brucella sunt aerobe sau microaerofile, nu cresc în condiții anaerobe. Temperatura optimă de creștere este de 36-37 °C; pH 7,0-7,2; cresc bine pe medii nutritive convenționale, dar mai bine cu adaos de ser sau sânge. Medii recomandate: agar nutritiv cu adaos de ser (5%) și glucoză; agar preparat pe infuzie de cartofi, cu adaos de 5% ser; agar sânge; bulion de carne-peptonă. O caracteristică a Brucellae abortus este nevoia sa de un conținut crescut de CO2 (5-10%) în atmosfera de creștere. Creșterea lentă este foarte caracteristică brucelelor, în special în primele generații: atunci când sunt semănate de la oameni și animale, creșterea apare uneori după 2-4 săptămâni. Coloniile de Brucella sunt incolore, convexe, rotunde - în formă de S sau rugoase - în formă de R, delicate și transparente la început, devenind tulburi cu vârsta.

Coloniile de Brucella canis, Brucella ovis și al 5-lea biotip Brucella suis au întotdeauna o formă R. Creșterea Brucellei în mediul de cultură este însoțită de o turbiditate uniformă. Tiamina, biotina și niacina sunt necesare pentru creșterea Brucellei. Brucella fermentează glucoza și arabinoza cu formarea de acid fără gaz, nu formează indol și reduce nitrații în nitriți. Formarea de hidrogen sulfurat este cea mai pronunțată la Brucella suis.

În total, 10-14 fracții de antigen au fost detectate la Brucella folosind imunoelectroforeza extractelor preparate din celule distruse prin ultrasunete. Brucella are un antigen comun specific genului, diverse alte antigene somatice, inclusiv M specific speciei (predominant în Brucella melitensis), A (predominant în Brucella abortus) și R (în forme brute). Antigenele M și A sunt detectate și la alte specii (biovaruri) de Brucella, dar în proporții diferite, care trebuie luate în considerare la identificarea lor. Au fost detectate antigene comune Francisella tularensis, Bordetella bronchiseptica și Y. enterocolitica (serotipul 09). Datorită faptului că unele caracteristici ale Brucellae variază, specia Brucella melitensis este împărțită în 3 biovaruri, specia Brucella abortus - în 9 și B. suis - în 5 biovaruri. Pentru diferențierea lor în specii și biotipuri și identificare, se utilizează un complex de caracteristici, care include, pe lângă proprietățile morfologice și tinctoriale, și nevoia de CO2 pentru creștere, capacitatea de a crește pe medii în prezența anumitor coloranți (fucsină bazică, tionină, safranină), de a secreta H2S, de a forma urează, fosfatază, catalază (activitatea acestor enzime este cel mai puternic exprimată la Brucella suis, acestea necrescând pe un mediu cu safranină), sensibilitate la bacteriofagul de Tbilisi, aglutinare cu seruri monospecifice. Dacă este necesar, se utilizează teste metabolice suplimentare: capacitatea de a oxida anumiți aminoacizi (alanină, asparagină, acid glutamic, ornitină, citrulină, arginină, lizină) și carbohidrați (arabinoză, galactoză, riboză, D-glucoză, D-eritritol, D-xiloză).

Al patrulea biovar este Brucella suis, deoarece principalul său purtător nu este porcul, ci renii, iar ținând cont de celelalte caracteristici ale sale, este recomandabil să îl distingem ca o specie independentă, Brucella rangiferis.

Al cincilea biovar B. suis include culturi izolate de la vaci și oi avortate și care conțin o formă R stabilă de Brucella.

Brucella către fagul de la Tbilisi: în diluția de lucru obișnuită, fagul lizează doar B. abortus. Cu toate acestea, într-o doză egală cu zece diluții de lucru, fagul lizează, deși slab, tulpinile de Brucella suis și Brucella neotomae.

[ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ]

Rezistența la Brucella

Brucella este relativ rezistentă în mediu. Supraviețuiește în sol umed și apă până la 2-3 luni, iar la o temperatură de 11-13 °C - până la 4,5 luni; în ape stagnante - până la 3 luni; în lapte - până la 273 de zile; în unt - până la 142 de zile; în brânză - până la 1 an; în brânză feta - până la 72 de zile; în lapte acru - până la 30 de zile; în chefir - până la 11 zile. Cu toate acestea, este foarte sensibilă la temperaturi ridicate - la 70 °C mor după 10 minute, iar când este fiertă - în câteva secunde. Pasteurizarea laptelui la 80-90 °C provoacă moartea lor după 5 minute. Brucella este, de asemenea, sensibilă la diverși dezinfectanți chimici.

Factorii de patogenitate ai Brucellei

Brucella nu formează exotoxine. Patogenitatea lor se datorează endotoxinei și capacității de a suprima fagocitoza, de a preveni „explozia oxidativă”. Factorii specifici care suprimă fagocitoza nu au fost studiați suficient. Patogenitatea brucelei este, de asemenea, asociată cu hialuronidaza și alte enzime. Este esențial ca brucela să aibă o proprietate alergenică foarte puternică, care determină în mare măsură patogeneza și tabloul clinic al brucelozei.

[ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ]

Imunitate post-infecțioasă

Imunitatea postinfecțioasă este de lungă durată și puternică, dar sunt posibile boli repetate. Imunitatea este reticulată (împotriva tuturor tipurilor de Brucella) și este cauzată de limfocite T și macrofage. La oamenii și animalele imune, fagocitoza este completă. Rolul anticorpilor în imunitate este de a stimula activitatea fagocitară. O reacție alergică pozitivă indică nu numai sensibilizarea organismului, ci și prezența imunității. O creștere a imunității poate apărea în cazul infecției cu doze mari de agent patogen sau cu virulența sa ridicată.

Epidemiologia brucelozei

Principalii purtători ai brucelozei sunt oile, caprele (Brucella melitensis), bovinele (Brucella abortus), porcii (Brucella suis) și renii (Brucella rangiferis). Cu toate acestea, aceștia se pot răspândi și la multe alte specii de animale (iaci, cămile, bivoli, lupi, vulpi, rozătoare, lame, saiga, bizoni, cai, iepuri de câmp, arici, găini etc.). Tranziția Brucella melitensis la bovine este deosebit de periculoasă, deoarece în acest caz își păstrează patogenitatea ridicată pentru oameni. Dintre toate speciile, cea mai patogenă pentru oamenii din țara noastră este Brucella melitensis. Aceasta provoacă boli la om în peste 95-97% din toate cazurile de bruceloză. Brucella abortus, de regulă, provoacă o formă latentă a bolii, iar manifestările clinice se observă doar în 1-3%. Brucella suis provoacă boala chiar mai rar (mai puțin de 1%). Patogenitatea brucelozei variază în funcție nu numai de specie, ci și de biovar. În special, biovarurile 3, 6, 7, 9 ale Brucella abortus nu sunt inferioare ca virulență față de Brucella melitensis. Variantele americane ale Brucella suis sunt, de asemenea, extrem de virulente, prin urmare, rolul etiologic al fiecărei specii de bruceloză se manifestă diferit în diferite țări. De exemplu, în Mexic, rolul principal în epidemiologia brucelozei îl joacă Brucella melitensis, în SUA - Brucella suis, iar în Canada și în unele țări europene - Brucella abortus. Este posibil ca biovarurile 3, 6, 7, 9 ale Brucella abortus să fi apărut ca urmare a migrării Brucellae melitensis la bovine și a transformării acesteia.

La animale, bruceloza apare ca o boală generală, al cărei tablou poate fi diferit. La bovinele mari și mici, cele mai tipice manifestări ale bolii sunt avorturile infecțioase, mai ales dacă sunt în masă. La porcine, avorturile sunt mai puțin frecvente, boala se manifestă sub formă de sepsis cronic cu afectarea articulațiilor, testiculelor și a altor organe. De la animalele bolnave, agentul patogen este excretat prin lapte, urină, fecale, puroi și mai ales abundent - în perioada de avort spontan cu fătul, membranele amniotice și secrețiile din canalul de naștere, care sunt cel mai infecțios material. Reproducerea abundentă a brucelelor în membranele fătului este asociată cu prezența unui alcool polihidroxilic - eritritolul, care servește ca un factor important de creștere pentru Brunella din toate speciile, cu excepția Brucella ovis.

O persoană se infectează de la animale (foarte rar de la o persoană bolnavă) în principal prin contact sau contact-cauze casnice (80-90% din toate bolile). Metoda alimentară de infecție se observă în principal la consumul de lapte nepasteurizat de la animale bolnave sau produse lactate preparate din acesta, precum și apă. Toate persoanele care au de-a face constant sau temporar cu animale sau materii prime de origine animală datorită profesiei lor (ciobani, crescători de vite, lăptărese, lucrători veterinari și alții) se pot infecta prin contact sau contact-cauze casnice. Brucella pătrunde în corpul uman prin piele sau, mult mai des, prin membranele mucoase ale gurii, nasului, ochilor (introdusă prin mâini murdare).

[ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ], [ 21 ]

Simptomele brucelozei

Perioada de incubație a brucelozei variază de la o săptămână la câteva luni.

Agentul patogen pătrunde în ganglionii limfatici prin căile limfatice; multiplicându-se, formează un „complex brucelozic primar”, a cărui localizare depinde de locul porții de intrare, dar cel mai adesea este vorba de aparatul limfatic al cavității bucale, glandele retrofaringiene, cervicale, submandibulare și aparatul limfatic al intestinului. Din ganglionii limfatici, agentul patogen pătrunde în sânge și se răspândește în tot corpul, afectând selectiv țesuturile sistemului limfohematopoietic. Bacteriemia și generalizarea procesului duc la alergii severe ale organismului. Bruceloza apare ca sepsis cronic. Acest lucru se datorează naturii incomplete a fagocitozei. Aflându-se și multiplicându-se în interiorul celulelor, inclusiv fagocitelor, brucelele sunt inaccesibile nici anticorpilor, nici medicamentelor chimioterapice. În plus, se pot transforma în forme L în interiorul celulelor și în această formă persistă în organism mult timp, iar revenind la forma originală, provoacă o recidivă a bolii.

Simptomele brucelozei sunt foarte diverse și complexe. Acestea depind în primul rând de alergia și intoxicația organismului și de organele și țesuturile implicate în procesul infecțios. Cel mai adesea, sunt afectate sistemele limfatic, vascular, hepatosplenic, nervos și în special musculo-scheletic. Bruceloza se caracterizează printr-o evoluție lungă (uneori până la 10 luni), în cazuri severe poate duce la pierderea pe termen lung a capacității de muncă și invaliditate temporară, dar totuși boala, de regulă, se termină cu o recuperare completă.

Diagnosticul de laborator al brucelozei

Bruceloza este diagnosticată folosind un test biologic, o metodă bacteriologică, reacții serologice, testul alergic Burnet și metoda hibridizării ADN-ADN. Materialul pentru studiu este sângele, măduva osoasă, secreția conjunctivală, urina, laptele matern (la mamele care alăptează), mai rar - fecalele, lichidul periarticular. Deoarece principalul loc de reședință al agentului patogen în organism sunt celulele sistemului hemo- sau limfopoietic, se recomandă izolarea hemo- sau mieloculturii. În cercetarea bacteriologică, este necesar să se asigure condițiile pentru creșterea Brucella abortus (nevoie de CO2). Identificarea culturilor de brucella izolate se efectuează pe baza semnelor specificate în Tabelul 30. Se recurge la un test biologic (infecția cobailor) în cazurile în care materialul este puternic contaminat cu microfloră străină și este dificil să se obțină o cultură pură a agentului patogen direct din acesta. Reacțiile serologice pot fi utilizate fie pentru a detecta antigenele agentului patogen, fie pentru a detecta anticorpi împotriva acestuia. Pentru detectarea antigenelor brucelozice care pot circula în sânge fie sub formă liberă, fie sub formă de complexe antigen + anticorp (CIC - complexe imune circulante), se utilizează următoarele reacții: RPGA (în special utilizând diagnosticul eritrocitar cu anticorpi monoclonali împotriva antigenului specific genului Brucella); reacție de hemaglutinare agregată (AGR); eritrocitele transportă anticorpi împotriva antigenelor brucelozice; reacții de coaglutinare, precipitare și IFM. Pentru detectarea anticorpilor în serul pacientului, se utilizează următoarele: reacția de aglutinare Wright, reacția Coombs (pentru detectarea anticorpilor incompleți), reacția de imunofluorescență indirectă, RPGA, IFM, RSK, OFR, precum și reacții accelerate pe sticlă: Heddleson, Rose Bengal, aglutinare latex, reacție de hemoliză indirectă (eritrocitele sensibilizate cu LPS Brucella sunt lizate în prezența anticorpilor și a complementului).

Cum să previi bruceloza?

Vaccinul antibrucelozic este o profilaxie specifică a brucelozei. Vaccinarea se efectuează folosind un vaccin viu preparat din tulpina B. abortus (vaccin viu antibrucelozic - LBB), numai în focarele de bruceloză de capră și oaie. Vaccinul se aplică cutanat, o singură dată. Revaccinarea se efectuează numai pentru persoanele cu test Burnet negativ și reacții serologice. Deoarece LBB are un efect alergenic puternic, a fost propus în schimb un vaccin chimic antibrucelozic (CBV) preparat din antigene ale peretelui celular al brucelei. Are imunogenitate ridicată, dar este mai puțin alergenic. O suspensie de brucele inactive (vaccin terapeutic inactiv) sau LBB poate fi utilizată pentru tratarea brucelozei cronice (stimularea formării imunității post-infecție).