Reacția în lanț a polimerazei (PCR) în diagnosticul bolilor infecțioase

PCR - una dintre metodele de diagnosticare ADN care să permită creșterea numărului de copii ale unei porțiuni detectabilă a genomului (ADN) de bacterii sau virusuri este de un milion de ori folosind o enzimă ADN polimerază. Un test pentru acest segment specific de acid nucleic genomic multiplicat în mod repetat (amplificat), care permite identificarea acestuia. În primul rând, o moleculă de ADN de bacterii sau virusuri prin încălzire împărțit în două lanțuri, apoi în prezența primerilor ADN sintetizat (secvență de nucleotide specifice genomic definit) este legarea lor cu porțiuni complementare ale ADN-ului, a sintetizat doua catenă a acidului nucleic după fiecare primer în prezența unei ADN polimerază termostabilă . Două molecule de ADN sunt obținute. Procesul se repetă de mai multe ori. Pentru diagnostic, doar o singură moleculă de ADN, adică o bacterie sau o particulă de virus. Reacționând un pas suplimentar - sinteza ADN-ului pe molecula de ARN utilizând enzima revers transcriptaza - a permis să testeze virusurile ARN, cum ar fi virusul HCV. PCR - proces în trei etape, cicluri repetate de denaturare, hibridarea amorselor, sinteza ADN (polimerizare). Cantitatea de ADN sintetizat a fost identificat prin ELISA sau electroforeză.

PCR poate fi utilizat într-un material biologic diferit - ser sau plasmă sanguină, răzuire a uretrei, biopsia, lichidul pleural, lichidul cefalorahidian, etc. Primul PCR a fost utilizat pentru diagnosticarea bolilor infecțioase, cum ar fi hepatita virală B, hepatita virală C, hepatita virală D, infecția cu CMV, infecție infecțioasă cu transmitere sexuală (gonoree, diynaya gunoi, mycoplasma, infecție ureaplasma), tuberculoza, HIV -infecție, etc.

Avantajul PCR în diagnosticul bolilor infecțioase față de alte metode de cercetare este următorul:

• agentul cauzal al infecției poate fi găsit în orice mediu biologic al corpului, inclusiv materialul obținut prin biopsie;
• Este posibil să se diagnosticheze bolile infecțioase în primele stadii ale bolii;
• Este posibilă o evaluare cantitativă a rezultatelor cercetării (câte virusuri sau bacterii sunt cuprinse în materialul investigat);
• sensibilitatea ridicată a metodei; de exemplu, sensibilitatea PCR pentru detectarea ADN - ului virusului hepatitei B in sange este 0,001grame pg / ml (aproximativ 4 x 10 ² copii / ml), în timp ce sensibilitatea unei metode de hibridizare a ADN folosind sonde ramificați - 2,1 pg / ml (aproximativ 7 x 10 ⁵ copii / ml).

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]