Celule stem hemopoetice din sângele ombilical

Sângele din cordonul ombilical acționează ca o sursă de celule stem hematopoietice cu privire la potențialul proliferativ și capacitățile de repopulare ale celulelor hematopoietice. Sa demonstrat în repetate rânduri că, la momentul livrării, sângele ombilical conține un număr suficient de mare de celule progenitoare hematopoietice deficitare. Unii autori consideră că avantajul transplantului de celule stem hematopoietice din sângele din cordonul ombilical este că nu este nevoie să se caute un donator compatibil cu antigeni HLA. Potrivit acestora, imaturității nou-născutului cauze ale sistemului imunitar a scazut activitatea funcțională a celulelor imunocompetente și, în consecință, mai mică decât în transplantul de măduvă osoasă, incidența „grefă contra gazdă“ severă reacție. In acest transplant de supravietuire a celulelor de sânge din cordonul ombilical nu este mai mic decât celulele maduvei osoase, chiar și în cazul utilizării unui număr mai mic de GSK administrat per 1 kg de greutate a pacientului. Cu toate acestea, în opinia noastră, numărul optim de întrebări transplantat celule sanguine din cordonul ombilical necesare pentru grefarea eficientă în corpul destinatarului, compatibilitatea lor imunologice, precum și o serie de alte aspecte ale transplantului de celule stem hematopoietice din cordonul ombilical de sânge necesită o analiză mai serioasă.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Obținerea de celule stem hematopoietice din sângele ombilical

Procedura de obținere a celulelor stem hematopoietice din sângele din cordonul ombilical necesită aportul său imediat după naștere și separarea de placenta, atunci cand placenta este in uter sau ex utero, precum si pentru cezariana, dar, de asemenea, ex-utero. Se arată că, în cazul scurtarea timpului de la naștere la nou-născut prin separarea placentei de până la 30 de secunde, volumul creșterilor obținute de sânge din cordonul ombilical, cu o medie de 25-40 ml. Cu o procedură ulterioară, aceeași cantitate de sânge se pierde. Se constată că separarea precoce a copilului de arsură nu are consecințe negative asupra nou-născutului.

Institutul de Cercetare rus de Hematologie și Transfuzie de Sânge dezvoltat o tehnologie eficientă și low-cost pentru ambele de sânge din cordonul ombilical la linii fiziologice ((70,2 + 25,8) ml) si cezariana ((73,4 + 25,1) ml). O metodă de separare a sângelui din cordonul ombilical, cu un randament suficient de mare de celule mononucleare și nucleate - (83.1 + 9.6) și (83,4 + 14,1)%, respectiv. Metoda îmbunătățită pentru crioconservarea sângelui din cordonul ombilical, care asigură o siguranță ridicată a celulelor mononucleare și CFU-GM - (96,8 + 5,7) și (89,6 + 22,6)%, respectiv. Eficiența metodei de prelevare a probelor de sânge din cordonul ombilical de drenaj folosind containerul „Kompoplast-300“ (Rusia). Gard autori de sânge din cordonul ombilical efectuat imediat după naștere și separarea de placenta, în ceea ce privește introducerea placenta in uter sau ex-utero. Inainte puncția ombilicală vena cordonului ombilical odată tratat cu 5% tinctură de iod, iar apoi de două ori - 70% alcool etilic. Sângele curgea prin tuburile de conectare la container în mod spontan. Durata gardului nu a durat mai mult de 10 minute. 66 colectate drenaj Metoda volumului probelor de sânge ombilical medie (72 + 28) ml, iar numărul de leucocite în eșantion medie full - (1,1 + 0,6) x x 107. Analiza sângelui din cordonul ombilical pentru sterilitate (contaminare bacteriană, HIV-1 virusurile hepatitei B și C, sifilis și infecția cu citomegalovirus), în doar o singură probă au fost identificați IgG anticorpi la virusul hepatitei C. într-un alt studiu odată placenta după suprafață fetale naștere a fost plasată pe un cadru special în jos, cablul a fost tratat cu 5% sodiu iod și 75% etil lea alcool. Vena ombilicală cu un ac drenat din sistemul de transfuzie (G16). Sângele a drenat în recipient în mod spontan. Volumul de sânge luat în acest mod a fost în medie (55 + 25) ml. Lucrarea G. Kogler și colab (1996) din cordonul de sânge prelevat mod închis și a obținut volume mari de sânge - în medie (79 + 26) ml. Autorii nota ca printre 574 probe de sânge din cordonul ombilical conțin aproximativ 7% mai mic de 40 ml de sânge, care nu permite să le folosească pentru transplant. K. Isoyama și colab (1996), luând sângele din cordonul ombilical prin exfusion activ folosind seringi, au primit o medie de 69,1 ml de sânge (volumul de sânge din cordonul ombilical au variat de la 15 la 135 ml). În cele din urmă, colaboratorii A. Abdel-Mageed PI (1997) prin cateterizare venelor punovinnoy au fost obținute într-o medie de 94 ml de sânge din cordonul ombilical (de la 56 la 143 ml).

Pentru a reduce riscul de infecție iatrogenă și contaminarea cu secreții materne dezvoltate de colectare a sângelui sistem închis bazat pe sistemul transfuzioinoy utilizat pe scară largă Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), conținând 62,5 ml de CPDA (citrat-fosfat-dextroză cu adenină) ca anticoagulant. Tehnologia de producere a materialului este de o importanță capitală pentru prepararea unei probe de calitate în raport cu cantitatea de conținut și puritate a suspensiei de celule. Dintre metodele existente de colectare a sângelui din cordonul ombilical, kotoryeuslovno clasificate în preferința închis, semideschis și deschis sistem sleduetotdavat întâi, ca într-un sistem închis reduce semnificativ riscul de contaminare microbiană a materialului, precum și contaminarea suspensiei de celule a celulei mamă.

A. Nagler și coautori (1998) au efectuat o analiză comparativă a eficacității tuturor celor trei sisteme de prelevare a probelor de sânge din cordonul ombilical. În prima variantă, procedura a fost efectuată într-un sistem închis prin exfuzia de sânge direct în recipient. În cea de-a doua variantă, sângele din cordonul ombilical a fost obținut prin metoda de exfuzie sanguină activă a seringilor1 cu spălare ulterioară a venelor placentei și drenajul simultan al sângelui în recipient (metoda deschisă). În cea de-a treia variantă, sângele a fost retras într-un sistem semi-deschis, prin extragerea activă a acestuia cu seringi și spălarea prin artera cordului ombilical cu o exfuzie simultană în recipient. In primul exemplu de realizare, autorii au obținut într - un volum de sânge din cordonul ombilical (76,4 + 32,1) ml la conținutul de leucocite (10,5 + 3,6) × 10 ⁶ în 1 ml de sânge. În a doua variantă, cifrele corespunzătoare au fost (174,4 + 42,8) ml și (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; a treia - (173,7 + 41,3) ml și (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Cea mai frecventă infecție a probelor de sânge din cordonul ombilical a fost observată la utilizarea unui sistem deschis. Se stabilește o corelație directă între masa placentară și volumul sângelui extras - cu creșterea masei placentare, cantitatea de sânge colectată crește.

După eșantionarea sângelui ombilical, etapa de separare urmează - izolarea celulelor mononucleare și purificarea suspensiei celulare de la eritrocite. În condițiile experimentale, celulele nucleate sunt izolate prin metoda sedimentării lor cu metilceluloză în timpul lizării eritrocitelor de amoniu prin clorură. Cu toate acestea, în scopuri clinice, metilceluloza nu trebuie utilizată, deoarece pierderea celulelor stem hematopoietice ajunge la 50-90%. Liza celulelor roșii din sânge în legătură cu volume mari de soluție de lucru în clinică, de asemenea, greu de realizat, deși procentul de separare în acest mod celulele nucleate cu fenotipul de CD34 + și celule progenitoare funcții CFU-GM și CFU-GEMM considerabil mai mare. A fost raportat un nou agent pentru izolarea celulelor mononucleare în soluția de densitate a cumpărătorului de gradient de densitate (BDS72). Această substanță are următorii parametri fiziologici: pH - 7,4, osmolalitate - 280 mosm / kg, densitate - 1,0720 g / ml. Potrivit autorilor, cu ajutorul acestuia este posibil să se izoleze până la 100% din celulele CD34 pozitive și să se elimine 98% din celulele roșii din sânge. Cu toate acestea, clinica nu aplică încă BDS72.

Metodele de separare testate celule nucleate din sângele din cordonul ombilical este utilizat în mod tipic o soluție de 10% sau soluție de gelatină SHE 3%. Eficiența precipitării eritrocitelor și izolarea celulelor nucleate în ambele cazuri este aproximativ egală. Cu toate acestea, în cazul utilizării ca agent sedimentează gelatină posibil să se obțină un număr ceva mai mare de CFU-GM, decât atunci când se utilizează SHE. Se presupune că diferența de eficiență de recuperare a CFU-GM viteză inegală datorită depunerilor de fracțiuni individuale sau nucleate capacitatea celulelor molecule SHE absorbiți pe receptorii celulari de suprafață hematopoietice și astfel blochează sensibilitatea lor la factorii de stimulare a coloniei, care sunt utilizate la cultivarea CFU-GM in vitro. Cu toate acestea, ambele sedimenter poate fi bine potrivite pentru izolarea celulelor nucleate în crearea de scară largă bănci de sânge din cordonul ombilical.

Metodele de separare și crioconservare a sângelui ombilical în principiu nu diferă de cele utilizate în activitatea cu celule stem hematopoietice ale sângelui periferic și ale măduvei osoase ale donatorilor adulți. Dar atunci când pregătește un număr mare de probe de sânge din cordonul ombilical pentru băncile sale, metodele de separare trebuie să fie, în primul rând, costuri reduse. Prin urmare, în prezent, din păcate, nevoile de utilizare clinică a dovedit metode de rutină de izolare și crioconservarea celulelor sanguine din cordonul ombilical, si mai eficient, dar metodele rămân experimentatori finansovoemkie mult.

Criterii generale de evaluare s-au stabilit cerințe hematopoetice numărul de celule și la studiul de probe de sânge din cordonul ombilical, pentru a detecta agenți infecțioși. Pentru a asigura transplantarea celulelor sanguine hematopoietice din sânge, toate probele de sânge trebuie examinate în principal pentru infecții hematogene și boli genetice. Unii autori recomanda metode speciale suplimentare de studiu de sânge din cordonul ombilical în scopul de diagnosticare a bolilor genetice, cum ar fi talasemie si siclemie, deficit de adenozin deaminază, agamaglobulinemia Bruton, boala Harlera si punter.

Conform recomandărilor Ticheli L. Et al (1998), în fiecare probă de sânge din cordonul ombilical este necesar pentru a determina numărul de celule nucleate, celule SB34-pozitive și CFU-GM, transporta HLA-dactilografiere pentru a determina grupa de sânge ABO și Rh membrilor. În plus, însămânțarea se efectuează teste bacteriologice, serologice pentru HIV și infecția cu CMV, HBsAg, hepatita C, HTLY-I și HTLV-II (leucemie cu celule T, umane), sifilis, toxoplasmoza. O reacție în lanț a polimerazei la citomegalovirus și infecția cu HIV este obligatorie.

Procedura de obținere a sângelui din cordonul ombilical ar trebui să fie efectuată în strictă conformitate cu principiile bioeticii medicale. Înainte de începerea colectării sângelui, este necesar să se obțină consimțământul femeii însărcinate pentru punerea sa în aplicare. Conversație preliminar cu femeia gravidă pentru a obține consimțământul în cunoștință de cauză pentru a efectua toate manipulările, deoarece umplerea exfusion de sânge și a documentelor de finisare se realizează numai de către profesioniștii din domeniul sănătății. În orice caz inadmisibil efectuarea oricăreia dintre aceste proceduri de personal cu biologice, chimice, farmaceutice și alte forme de educație non-medicale, având în vedere încălcarea normelor stabilite de bioetică și drepturile omului. Pentru teste pozitive pentru purtător AgHBs, anticorpi la agentul cauzal al hepatitei C, nu au fost luate cu HIV și sifilisul sângele din cordonul ombilical, iar probele de sânge recoltate este deja aruncate și distruse. Trebuie remarcat faptul că transportul infecțiilor latente la nou-nascuti este mult mai rar decât la adulți, prin urmare, probabilitatea transferului și dezvoltarea de complicații infecțioase ale perfuzii hematopoietice de celule sanguine din cordonul ombilical hematogenă este semnificativ mai mică decât în cazul transplantului de măduvă osoasă de la donatori adulți.

Un punct important de aplicare a sângelui din cordonul ombilical in clinica este evaluarea grefei, care se bazează pe cuantificarea celulelor stem hematopoietice într-un eșantion de celule sanguine din cordonul ombilical și dozele necesare pentru transplant. Nu au fost încă elaborate standarde pentru numărul optim de celule sanguine din cordonul ombilical necesare transplantului. Nu există nici un punct de vedere general acceptat, chiar și pe acești parametri de rutină cum ar fi numărul de celule CD34 pozitive și CFU-GM. Unii autori au evaluat potențialul celulelor hematopoietice prin analiza culturilor pe termen lung cu determinarea conținutului de unități formatoare de colonii comune granulocite, eritrocite, monocite și megacariocite - CFUGEMM.

Cu toate acestea, în setările clinice, evaluarea standard a transplantului de sânge din cordonul ombilical include de obicei numai determinarea numărului de celule nucleate sau mononucleare.

Depozitarea celulelor stem hematopoietice din sângele ombilical

Unele probleme există în tehnologia de stocare a celulelor hematopoietice din sângele din cordonul ombilical. Cand crioconservarea celulelor stem hematopoietice, în scopul de a atinge modul lor de congelare optim trebuie să reducă la minimum cantitatea de sânge din cordonul ombilical și celule roșii din sânge anterior eliminat pentru a evita hemoliza și riscul reacției de incompatibilitate a antigenele eritrocitare (ABO, Rh). Pentru aceste scopuri, sunt adecvate diferite metode de izolare a celulelor nucleate. In anii 90 cel mai folosit metoda de separare a celulelor nucleate într-un gradient de densitate bazată pe Ficoll, cu o densitate de 1,077 g / ml, sau percolare cu densitate 1,080 g / ml la începutul secolului trecut. Separarea cordonului de sânge prin gradient de densitate permite selectarea celulelor predominant mononucleare, dar duce la pierderi considerabile de celule precursoare hematopoietice - de până la 30-50%.

Eficiența de sedimentare a amidonului hidroxietil în procesul de izolare a celulelor din sângele ombilical este estimată în moduri diferite. Unii autori indică o calitate scăzută a separării utilizând această metodă, în timp ce alți cercetători, dimpotrivă, printre toate metodele posibile preferă să aloce sângele cordonului HSC tocmai folosind o soluție de 6% hidroxietil amidon. Acest lucru evidențiază eficiența ridicată a sedimentării celulelor hemopoietice, care, potrivit unor date, atinge de la 84% la 90%.

Susținătorii unui alt punct de vedere cred că aproape toate procesele de fracționare implică mari celule pierderi yadrosoderzhashih și oferă pentru a face separarea prin centrifugare, separarea sângelui din cordonul ombilical în 3 fracții: eritrocit, leucocite și inel de plasmă. Separarea celulelor în acest mod, inventatorii au descoperit că conținutul celulelor mononucleare ale celulelor timpurii precursoare hematopoietice și celule cu CD34 + immunophenotype în cele din urmă a fost, respectiv, 90, 88 și 100% din nivelul inițial. Cantități similare de creștere purificată în această metodă de celule din cordonul ombilical de sânge obținute de alți cercetători: după sedimentare nucleate alocat 92%, 98% - mononuclear, 96% - celule CD34-pozitive și 106% din unități formatoare de colonii.

La sfârșitul anilor 1990, gelatina a fost utilizată pe scară largă ca agent de sedimentare. În practica clinică, cu ajutorul gelatinei, celulele stem hematopoietice din sângele ombilical au fost izolate din 1994. Când se utilizează o soluție de gelatină de 3%, eficiența izolării celulelor nucleate ajunge la 88-94%. Utilizarea pe scară largă a gelatinei în dezvoltarea băncii de sânge din cordonul ombilical a confirmat avantajele sale față de alți agenți de sedimentare. Analiza comparativă a tuturor metodelor de mai sus de izolare a celulelor nucleate în ceea ce privește utilizarea lor secvențială în fiecare din probele de sânge din cordonul ombilical de testare a aratat ca optime celulele mononucleare-sedimenter afară cu fenotip CD34 + / CD45 +, precum și de numărul de CFU-GM și CFU-GEMM este de 3% gelatină. Sa dovedit a fi semnificativ metode mai puțin eficiente folosind gradient de densitate Ficoll și utilizarea de metil celuloză și hidroxietil amidon în care pierderea de celule hematopoetice a ajuns la 60%.

Extinderea volumului de transplant de celule stem din sângele din cordonul ombilical este asociat nu numai cu dezvoltarea metodelor de producere a acestora, ci și cu depozitarea acestora. Există multe probleme legate direct de prepararea sângelui din cordonul ombilical pentru stocarea pe termen lung și alegerea tehnologiei optime de crioconservare pentru eșantioanele sale. Printre acestea se numără problema oportunității efectuării procedurilor de separare, utilizarea diverselor medii de conservare și utilizarea metodelor de preparare a celulelor decongelate pentru transplant. Transportul probelor native de sânge din cordonul ombilical este adesea efectuat din regiuni îndepărtate de centrele hematologice. În legătură cu aceasta, apare problema perioadelor admise de depozitare a sângelui din cordonul ombilical de la momentul primirii acestuia până la începutul crioconservării, care are o importanță deosebită în dezvoltarea băncilor de sânge din cordonul ombilical.

Studiul activității funcționale a celulelor sanguine din cordonul ombilical hematopoietice după stocare pe termen lung (până la 12 ani), în azot lichid a arătat că aproximativ 95% din celulele hematopoietice în acest timp nu își pierd capacitatea de proliferare ridicată. Lucrarea Yurasova S. și colab (1997) au demonstrat că sângele din cordonul ombilical depozitat la temperatura camerei (22 ° C) sau la 4 ° C timp de 24 și 48 de ore nu reduce substanțial viabilitatea celulelor hematopoietice că nivelul inițial este în mod adecvat 92 și 88%. Cu toate acestea, dacă timpul de păstrare este prelungit la trei zile, numărul de celule nucleate viabile din sângele din cordonul ombilical este semnificativ redus. În același timp, alte studii a constatat că, în timpul depozitării timp de 2-3 zile, la o temperatură de 22 ° C sau 4 afectat în principal viabilitatea granulocitelor mature, dar nu și celulele hematopoietice.

Pe viabilitatea sângelui din cordonul ombilical celule stem hematopoietice poate avea un impact negativ al componentelor sistemului la colecția sa. Analiza efectului diferitelor anticoagulante, care se datorează legării de ioni de calciu (ACD, EDTA, XAPD-1) pentru celulele precursoare hematopoietice în condiții de stocare de sânge din cordonul ombilical de 24 la 72 de ore mecanism de acțiune a arătat impactul negativ al acestora asupra viabilității celulelor nucleate. În acest sens, autorii recomanda utilizarea de PBS (soluție tampon de fosfat), cu adaos de heparină nativ fără conservant la o concentrație de 20 U / ml, care, în opinia lor, face posibilă creșterea duratei de depozitare nefracționate de sânge din cordonul ombilical pana la 72 de ore și salvează activitatea funcțională a unităților formatoare de colonii. Cu toate acestea, în studiul de conservare CFU-GM și CFU-G demonstrat că timpul ombilical de stocare de sânge din cordonul ombilical, înainte de crioconservare nu trebuie să depășească nouă ore. Evident, în acest caz, ar trebui să acționeze principiul că, dacă există date contradictorii ar trebui să utilizeze minim recomandat durata de stocare de sânge din cordonul ombilical și începe o înghețare izolat celule programabile cât mai repede posibil.

Atunci când se blochează celulele stem hematopoietice din sângele ombilical, o soluție de DMSO de 10% este de obicei utilizată ca un crioprotector. Cu toate acestea, în plus față de efectul crioprotector exprimat, dimetilsulfoxidul în această concentrație are un efect citotoxic direct, chiar și în condițiile unei expuneri minime la celulele formatoare de sânge din sângele ombilical. Pentru a reduce efectul citotoxic al DMSO, se aplică o temperatură de expunere zero, o creștere a vitezei tuturor manipulărilor și spălarea repetată după dezghețarea probelor de cordon ombilical.

Institutul de Hematologie și Transfusiologie al Academiei de Științe Medicale din Ucraina a dezvoltat o direcție științifică din 1995, al cărui scop este de a studia sângele din cordonul ombilical ca sursă alternativă de celule stem hemopoietice. În special, au fost dezvoltate noi tehnologii pentru crioconservarea la temperaturi joase a celulelor hemopoietice de sânge din cordonul ombilical nefracționate și fracționate. Ca un crioprotector, se utilizează polivinilpirolidonă medicală cu greutate moleculară mică. Metoda de crioconservare a sângelui din cordonul ombilical nefracționată se bazează pe tehnologia originală de pre-preparare a celulelor pentru înghețare și pe tehnica tratamentului special al suspensiei celulare imediat înainte de transplantare.

Unul dintre cei mai importanți factori care afectează nivelul activității funcționale a celulelor stem hematopoietice crioconservate este viteza de răcire a suspensiei celulare, în special în timpul fazei de cristalizare. O abordare software pentru rezolvarea problemei vitezei și timpului de înghețare oferă oportunități deosebite pentru crearea unor metode de crioconservare simple și foarte eficiente, fără spălarea suspensiei celulare de la crioprotectori înainte de transplant.

Etapele înghețării și dezghețării imediate sunt cele mai periculoase pentru viabilitatea celulelor în timpul pregătirii lor. Atunci când se îngheață celulele hemopoietice, o parte semnificativă a acestora poate fi distrusă în momentul trecerii mediului intermediar de la lichid la faza solidă - cristalizare. Pentru a reduce procentul de moarte celulară, se utilizează crioprotectori, mecanismele de acțiune și eficacitatea crioprotectoare au fost acoperite în mod adecvat în literatura științifică.

O promițătoare Tehnici direcția de optimizare de crioconservare a maduvei osoase si celule sanguine din cordonul ombilical este de a combina în aceeași soluție la concentrații scăzute de cryoprotectants cu mai multe mecanisme diferite de acțiune, de exemplu, acționând asupra nivelului intracelular de DMSO și hidroxietil amidon sau albumină având un efect de îngrădire extracelular.

Pentru crioconservarea celulelor sanguine din cordonul ombilical sunt utilizate în mod tradițional soluție de DMSO 20%, care este agitare permanent mecanic într-o baie de gheață, se toarnă încet în suspensia de celule pentru a obține egal (1: 1), raportul de volum de suspensie de celule și Crioprotectorul. Concentrația finală de dimetil sulfoxid este de 10%. Suspensia celulară este apoi răcită pe un criostat software cu o viteză de HS / min până la -40 ° C, după care viteza de răcire este mărită la 10 ° C / min. După atingerea -100 ° C, recipientul cu suspensie celulară este plasat în azot lichid (-196 ° C). Prin această metodă de crioconservare, siguranța celulelor mononucleare active funcționale după decongelare atinge 85% din nivelul inițial.

Modificările metodelor de crioconservare vizează reducerea concentrației de DMSO prin adăugarea de amidon hidroxietil (concentrațiile finale de dimetilsulfoxid și hidroxietil amidon sunt de 5% și, respectiv, 6%). Eficiența ridicată a acestei combinații de crioprotectori este observată atunci când suspensia celulelor mieloide este înghețată, fără o citoprotecție mai mică decât cu o singură soluție de dimetilsulfoxid 10%. Numărul celulelor nucleate viabile a atins 96,7% din nivelul de bază, iar activitatea lor funcțională, estimată prin numărul de CFU-GM, a fost de 81,8%.

Atunci când se utilizează o soluție de dimetil sulfoxid la concentrații variind de la 5 la 10%, în combinație cu 4% hidroxietil amidon (concentrația finală), a constatat că păstrarea celulelor CD34 pozitive în aceste intervale de dimetilsulfoxid practic neschimbat. În același timp, în condiții de reducere a concentrației de DMSO 5-2.5% se observă moartea în masă a celulelor sanguine din cordonul ombilical - numărul de unități de celule viabile este redusă 85.4-12.2%. Alți autori, de asemenea, a concluzionat că a fost de 5 și 10% soluție de dimetil sulfoxid (în varianta de realizare a drepturilor de autor - în combinație cu ser autolog) cu maximă eficiență furnizează citoprotecței în timpul crioconservarea HSC sânge din cordonul ombilical. În plus, pe rând de înaltă siguranță înghețate și dezghețate de celule este marcat în cazul combinației de 5 sau 10% DMSO soluție hidroxietilamidon 4%, în particular, la o viteză de răcire controlată a TOS / min. Într-o altă hârtie utilizată soluție crioprotectoare formată din trei ingrediente deja - DMSO, albumină umană purificată și mediu RPMI într-un raport de 1: 4: 5, care a fost adăugat la suspensia de celule până la un raporturi de volum egal (concentrația finală de DMSO a fost de 5%). După decongelare într-o baie de apă la o temperatură de + 4 ° C, siguranța CFU-GM a depășit 94%.

Unii autori sugerează folosirea sângelui din cordonul ombilical nefracționat pentru crioconservare, deoarece se pierd pierderi semnificative de celule hematopoietice în timpul eliminării celulelor roșii din sânge. În această realizare, o soluție de dimetilsulfoxid 10% este utilizată pentru a proteja celulele mononucleare de efectele dăunătoare ale criocrilizării. Congelarea se efectuează la o viteză de răcire constantă de HS / min până la -80 ° C, după care suspensia de celule din sângele ombilical este imersată în azot lichid. Prin această metodă de înghețare are loc o liză parțială a eritrocitelor, prin urmare, eșantioanele de sânge nu necesită fracționare. După dezghețare, suspensia de celule este spălată din hemoglobină liberă și dimetilsulfoxid într-o soluție de albumină umană sau în serul autolog al pacientului și utilizată pentru transplant.

Conservarea celulelor progenitoare hematopoietice după decongelare sângele din cordonul nefracționate este într-adevăr mai mare decât fracționat, dar în legătură cu krioustoychivostyu celulelor roșii din sânge poate cauza probleme grave, ca urmare a Transfuzia post-transfuzie de celule roșii ABO incompatibile. În plus, volumul sângelui nefracționat stocat crește semnificativ. Din punct de vedere clinic, încă mai preferabil crioconservare izolat anterior și purificat din alte fracțiuni celulare ale celulelor hematopoietice din sânge din cordonul ombilical.

În particular, o metodă este crioconservarea celulelor sanguine din cordonul ombilical fracționat care permite de a elimina eritrocitele în curs de pregătire pentru congelare, care utilizează o soluție 6% hidroxietil amidonului în soluția compoziției plazmozameshchath „Stabizol“. După dezghețare, suspensia de celule astfel obținută este gata pentru utilizare clinică fără manipulare suplimentară.

Astfel, în prezent, există multe moduri destul de eficiente de crioconservare a sângelui ombilical. Diferența principală este că eșantioanele de sânge sunt înghețate nefracționate sau supuse separării în fracțiuni celulare în timpul etapei de preparare și celulele nucleate recoltate fără un amestec de eritrocite.

Transplantul de celule stem hematopoietice din sângele ombilical

La sfârșitul anilor 80 - începutul anilor 90 ai secolului trecut sa constatat că sângele ombilical care alimentează fătul în timpul sarcinii este caracterizat de un conținut ridicat de celule stem hematopoietice. Simplitatea relativă de a obține celule sanguine din cordonul ombilical și absența unor probleme etice evidente au promovat folosirea celulelor stem din cordonul ombilical în medicina practică. Primul transplant cu succes de sânge din cordonul ombilical unui copil cu anemie Fanconi a servit drept punct de plecare pentru extinderea volumelor de transplant de celule stem din sângele ombilical și crearea unui sistem pentru furnizarea de bănci. În sistemul global al băncilor de sânge din cordonul ombilical, cel mai mare este Centrul de Placentar din New York, care se află pe bilanțul Institutului Național de Sănătate. Numărul probelor de sânge din cordonul ombilical stocat în această bancă se apropie de 20 de societăți cu răspundere limitată. Numărul de destinatari (în principal copiii) crește, de asemenea, și sa realizat un transplant de succes. Potrivit Departamentului de Sănătate al SUA, perioada de recidivă a vieții post-transplant a beneficiarilor de sânge din cordonul ombilical HSC a depășit deja 10 ani.

Acest lucru nu este surprinzător, deoarece numeroase studii ale potențialului hematopoietice din sângele din cordonul ombilical au arătat că cantitatea și calitatea celulelor stem mai timpurii nu numai că nu este inferior la un om adult de măduvă osoasă, dar, de asemenea, de unele măsuri pe care le depășesc. Un potențial proliferativ mai mare de celule sanguine stem cauzate de celule de semnalizare caracteristici de dezvoltare, prezența receptorilor pe CSH la factorii de creștere specifici, capacitatea celulelor sanguine din cordonul ombilical la autocrin, producerea de factori de creștere, dimensiunea mare și lungimea telomerilor.

Astfel, caracteristici genomice si fenotipice ale celulelor stem hematopoietice din cordonul ombilical predetermină sânge calitate grefarea potențial ridicat de recuperare hematopoietică donator la primitor.

Avantajele celulelor stem hematopoietice din sângele ombilical

Printre beneficiile reale de utilizare a celulelor stem din sângele din cordonul hematopoietice pentru transplant față de alte surse de celule hematopoietice trebuie remarcat aproape de zero de risc pentru sănătatea donatorului (dacă nu este privit ca o astfel de placenta), în timp ce eliminând necesitatea anesteziei generale. Utilizarea transplantului de celule din sânge ombilical se extinde parțial din cauza prin sistemul de grefa compatibil HLA (incompatibilități de la unu la trei antigeni). Tehnica de stocare pe termen lung a celulelor sanguine din cordonul ombilical hematopoietice în stare congelată, ceea ce crește probabilitatea de a obține rare HLA-tip și reduce timpul de căutare cu potrivire HLA transplant alogenic. În același timp, riscul de a dezvolta anumite infecții latente transmise de calea de transmisie este semnificativ redus. În plus, există o formă ieftină de asigurare biologică de viață în legătură cu posibilitatea utilizării celulelor sanguine din cordonul ombilical pentru transplantul autolog.

Cu toate acestea, din cauza unor volume mici de sânge care pot fi colectate din placenta (o medie de cel mult 100 ml), în prim-plan problema obținerii cantității maxime posibile de sânge din vena cordonului ombilical in stricta conformitate cu condițiile de risc minim de contaminare bacteriană a sângelui din cordonul ombilical mostre ombilical derivate.

Celulele hematopoietice primitive din sângele din cordonul ombilical sunt în general identificate prin prezența pe CD34 lor glikofosfoproteina de suprafață și pe baza proprietăților lor funcționale prin examinarea test sau a coloniei formarea clonogenică in vitro. Analiza comparativă a arătat că în sângele din cordonul ombilical și măduva osoasă conținutul maxim de celule mononucleare CD34-pozitive în fracțiunea sunt, respectiv, 1,6 și 5,0%, nivelul maxim al unităților formatoare de colonii într-o subpopulație de celule + CD34 - 80 și 25%, randamentul total clonarea CD34 + celule p - 88 și 58%, colonia maximă care formează celule cu potențial mare de proliferare (HPP-CFC din -populyatsii CD34 +) - 50 și 6,5%. Trebuie adăugat că eficiența de clonare a CD34 + CD38-celule si capacitatea de a răspunde la stimularea citokinelor, de asemenea, mai mare in celulele stem hematopoietice din sângele din cordonul ombilical.

Combination antigeni fenotipice Thy-1, CD34 și CD45RA confirmă capacitatea ridicată de proliferare a celulelor hematopoietice din sânge din cordonul ombilical, și exprimarea celor trei antigene de pe suprafata celulelor sanguine din cordonul ombilical indică faptul că ele aparțin celulei stem. În plus, sa stabilit că sângele din cordonul ombilical conține celule cu un fenotip CD34 + care nu au markeri de diferențiere liniară. Nivelul în subpopulații de celule din sânge din cordonul ombilical cu profilul fenotipic al CD34 + / Lin este de aproximativ 1% din numărul total de celule CD34-pozitive. Celulele progenitoare hematopoietice dau naștere la sângele din cordonul ombilical ca linii de celule limfoide, și un număr de diferențiere lineară pluripotente celulară mieloidă, care indică, de asemenea, că ele aparțin celulelor stem.

După cum sa menționat deja, diferențele esențiale dintre măduva osoasă și sângele din cordonul ombilical sunt într-o cantitate obținută prin o singură procedură de prelevare folosite pentru transplant de celule hematopoietice. Cand maduva osoasa pierderea transplant a masei de celule în procesul de separare, crioconservare, decongelare și testare sunt permise în intervalul de 40-50%, celulele sanguine din cordonul ombilical astfel pierderea este foarte importantă, deoarece atunci când se utilizează numărul insuficient de transplant HSC poate fi de neconceput. Potrivit lui G. Kogler și colab (1998), pentru transplant de celule din greutatea corporală a primitorului de minimum 10 kg potențial de transplant (numărul total al colectate probe de sânge din cordonul ombilical - 2098), pot fi toate mostrele de sânge din cordonul ombilical, greutate corporală de 35 kg - 67%, și numai 25% din eșantioane vor putea oferi transplant efectiv la pacienții cu o greutate corporală de 50-70 kg. Această situație clinică indică necesitatea de a optimiza și de a îmbunătăți eficacitatea metodelor existente de prelevare, reproducere și stocare a celulelor sanguine din cordonul ombilical. Prin urmare, problemele de standardizare a metodelor de prelevare, testare, separarea și crioconservare a sângelui din cordonul ombilical este larg discutată în literatura de specialitate pentru crearea băncilor de sânge, utilizarea sa in clinica, precum și stabilirea condițiilor și condițiile de depozitare a celulelor stem hematopoietice din sangele din cordonul ombilical.

[7], [8], [9],

Utilizarea celulelor stem hematopoietice din sângele ombilical în medicină

De obicei, până la 10 ⁶ celule stem hematopoietice pot fi izolate din sângele ombilical , rareori mai mult. În legătură cu aceasta, până în ziua de azi, rămâne întrebarea suficienței atâtor celule hematopoietice din sângele ombilical pentru a restabili hematopoieza destinatului adult. Opiniile pe această temă au fost împărțite. Unii cercetători cred că această sumă este suficientă pentru copii de transplant, dar prea mici pentru transplant uman adult, pentru care administrarea este optimă (7-10) x 10 ⁶ celule CD34-pozitive per 1 kg de greutate corporală - medie de 7 10 × ⁸ pe transplant. Din aceste calcule rezultă că o probă de cordon ombilical conține 700 de celule stem hematopoietice mai mici decât este necesar pentru un transplant la un pacient adult. Cu toate acestea, o astfel de evaluare cantitativă se face prin analogie cu numărul de celule de măduvă osoasă transfuzate și ignoră total caracteristicile de dezvoltare ale hematopoiezei.

În special, se ignoră faptul capacitatea de proliferare mai mare de celule stem hematopoietice din sângele din cordonul ombilical comparativ cu celulele precursoare hematopoietice din măduva osoasă. Constatarile din potentialul formatoare de colonii in vitro sugerează că o singură doză poate furniza sânge din cordonul ombilical al refacerii hematopoietice destinatar pentru adulți. Pe de altă parte, nu trebuie să uităm că numărul de CSH scade chiar și în procesul de dezvoltare embrionare: conținutul de celule CD34-pozitive în sângele din cordonul ombilical este redus liniar de 5 ori într-o perioadă de 20 de săptămâni (sânge pentru studiu a fost obținut în cazul încetării premature a sarcinii), la 40 de săptămâni de gestație (perioada de muncă fiziologică), însoțită paralellno în creștere permanentă a markerilor de expresie citodiferentiere liniar.

Din cauza lipsei unei abordări standardizate pentru cuantificarea în probele de sânge din cordonul ombilical de celule progenitoare controverse peste doza optima de celule stem hematopoietice de sange ombilical continua. Unii cercetători cred că , criteriile de selecție a probelor de sânge din cordonul ombilical poate fi utilizat numărul de celule nucleate și celule mononucleare, recalculeze de greutatea corporală a primitorului, adică, doza lor. Unii autori cred că pragul minim de cuantificare a celulelor CD34 + chiar și pentru autotransplant GCW este de 2 x 10 ⁶ / kg. Creșterea dozei celulelor hematopoietice la 5 x 10 ⁶ celule / kg (total de 2,5) oferă deja o mai potrivită pentru perioada post-transplant precoce, reduce incidența complicațiilor infecțioase și scurtează perioada de tratament cu antibiotice preventiv.

Potrivit lui E. Gluckman și colab (1998) in hematologie pentru transplantul cu succes a celulelor sanguine din cordonul ombilical este introducerea de cel puțin 3,7 x 10 ⁷ celule nucleate per 1 kg greutate corporală de primitor. Prin reducerea dozei de celule stem hematopoietice la 1 x 10 ⁷ sau mai puțin de celule nucleate per 1 kg greutate corporală a pacientului și riscul de insuficienta a grefei creste cancer recurent sange dramatic. Trebuie recunoscut faptul că numărul minim de celule progenitoare necesare pentru recuperarea rapidă a hemopoiezei după alotransplantul GSG nu este încă cunoscut. Teoretic acest lucru poate fi realizat cu ajutorul unei singure celule, dar in os clinic transplant de măduvă de grefare transfuzie rapidă și stabilă garantată cel puțin (1-3) x 10 ⁸ celule nucleate per 1 kg de greutate corporală a pacientului.

Un studiu detaliat recent pentru a determina cantitatea optimă de HSC în oncohematologie a inclus observația pacienților a trei grupuri izolate în funcție de conținutul de celule CD34-pozitive în materialul de transplant. Pacientii au fost administrat primul grup (3-5) x 10 ⁶ celule / kg. Doza GSK la pacientii din al doilea grup sa ridicat la (5-10) x 10 ⁶ celule / kg și al treilea grup de pacienti transplantat mai mult de 10 x 10 ⁶ CD34 + celule / kg. Cele mai bune rezultate au fost observate în grupul de destinatari tratați cu numărul grefei de celule CD34-pozitive au fost egale cu (3-5) x 10 ⁶ / kg. Cu o creștere a dozei de celule transplantate de peste 5 × 10 ⁶ / kg, nu au fost identificate beneficii semnificative din punct de vedere statistic. CSH conținut Astfel foarte mari în transplant (> 10 x x 10 ⁶ / kg) a fost asociat cu o cantitate semnificativă de reinfusion reziduală a celulelor tumorale, ceea ce duce la recidiva bolii. Nu a existat o relație directă între numărul de celule progenitoare alogene transplantate și dezvoltarea reacției "grefă versus gazdă".

Experiența mondială acumulată de transplant de sânge din cordonul ombilical HSC confirmă potențialul lor de repopulare ridicat. Rata de înmuiere a transplantului de sânge din cordonul ombilical corelează cu numărul de celule nucleate introduse. Cele mai bune rezultate sunt observate cu un transplant de 3 × 10 ⁷ / kg, în timp ce pentru măduva osoasă această doză este de 2 × 10 ⁸ / kg. Conform datelor centrelor de coordonare, la sfârșitul anului 2000 au fost realizate în lume 1200 de transplanturi de celule sanguine ombilicale, în principal de la rude donatoare (83%). Evident, sângele din cordonul ombilical ar trebui considerat ca o alternativă la maduva osoasă pentru transplant la pacienții cu hemoblastoză.

Cu toate acestea, natura neonatală sursa Cordova de tesut hematopoietic încurajarea datorită prezenței caracteristicilor funcționale ale GCW sale. Cu toate acestea, experiența clinică poate da un răspuns la problema caracterului adecvat al unui eșantion de sânge din cordonul ombilical pentru refacerea hematopoietică adult al destinatarului cu aplazia hematopoiezei. Transplantul de celule sanguine din cordonul ombilical este utilizat in tratamentul multor boli ale naturii tumorale si non-tumorale: leucemii și sindroame mielodisplazice, limfom non-Hodgkin, și neuroblastom, anemie aplastică, congenital anemia Fanconi si fan Diamond Black, deficit de adeziune a leucocitelor, sindromul Barr, sindromul Gunther boala Harlera, talasemia .

O atenție deosebită și cercetarea separată merită aspectele imunologice ale transplantului de celule care formează sânge din sângele ombilical. Se arată că, în cazul transplantului de celule sanguine stem de la donatori cu rezultate incomplete transplant de potrivire HLA sunt destul de satisfăcătoare, care, potrivit autorilor, indicând un sânge din cordonul imunoreactivitate mai mic decât măduva osoasă.

Un studiu detaliat al compoziției celulare a sângelui din cordonul ombilical au prezentat atât caracteristici de spectru fenotipic celulelor efectoare ale sistemului imunitar si activitatea lor funcțională, care permite să ia în considerare sângele din cordonul ombilical ca sursa de CSH cu risc relativ scăzut de reacție „grefă contra gazdă“. Caracteristici suplimentare imaturitate funcționale de celule sanguine din cordonul ombilical imunocompetente trebuie remarcat dezechilibrul producției de citokine și o scădere a sensibilității la citokine nou reglarea răspunsului imun. Inhibarea rezultată a activității limfocitelor citotoxice este considerată un factor care contribuie la formarea toleranței imunologice la țesutul hemopoietic transplantat. Într-o populație de limfocite din sânge din cordonul ombilical, spre deosebire de sânge și măduva osoasă periferic de la donatori adulți, a dominat celulele inactive, imature și celule supresoare. Aceasta indică o scădere a disponibilității limfocitelor T din cordonul ombilical pentru răspunsul imun. O caracteristică importantă a populației de monocite a celulelor sanguine din cordonul ombilical este conținutul scăzut de celule complete și active prezentând antigenul activ.

Pe de o parte, un grad scăzut de maturitate a celulelor efectoare ale sistemului imunitar în lecturi de sânge din cordonul ombilical se extinde la utilizarea sa in clinica, deoarece aceste caracteristici permit reducerea intensității conflictelor între celulele imune donatoare și beneficiare. Dar, pe de altă parte, știm de existența unei corelații între gradul de reacție „boala grefă contra gazdă“ și efect antitumoral de transplant, de exemplu, efectul dezvoltării „grefa-contra-leucemie“. În legătură cu acest studiu citotoxicitatea anti-tumorale a celulelor sanguine din cordonul ombilical a fost realizat. Rezultatele indică faptul că, în ciuda răspunsului imun într-adevăr slăbit de celule sanguine din cordonul ombilical la stimularea antigenică, activate în primul rând sunt celulele killer naturale si celulele killeropodobnymi care sunt implicate în mod activ în mecanismele de implementare a citotoxicitatii anti-tumoral. Mai mult, în limfocitelor din sângele cordonului au fost gasite cu fenotipul CD16 + CD56 + și CD16 „TCRA / p +. Se presupune că aceste celule sunt într-o formă activată a pune în aplicare reacția“ grefa-contra-leucemie“.

La Institutul Oncologic, Academia de Științe Medicale din Ucraina celule hematopoietice crioconservate din sângele din cordonul ombilical au fost administrate la pacienții cu cancer cu hipoplazie persistenta de hematopoiezei din cauza chimioterapie si radioterapie. La acești pacienți, transplantul de celule stem hematopoietice din sângele cordonului ombilical restaurat in mod eficient opresiune din sânge, evidențiată prin creșterea persistentă a elementelor formate mature din sângele periferic, precum și o creștere a indicatorilor de caracterizare a stării imunității celulare și umorale. Stabilitatea repopulyatsionnogo efect după transplantul de celule sanguine din cordonul ombilical hematopoietice permite radiatii si chimioterapie a continuat, fără a întrerupe tratamentul. Există dovezi de pacienti cu cancer de sânge din cordonul ombilical celule stem o mai mare eficiență alogrefă: riscul anual de reapariție a unei tumori în utilizarea lor a fost de 25% față de 40% la pacienții cu o genă de măduvă osoasă alogenă transplantat.

Mecanismul de acțiune al celulelor stem din cordonul crioconservate trebuie considerat ca rezultat al stimulării umoral beneficiarilor hematopoieză cauzate de capacitatea unica a celulelor neonatal la autocrin, producerea de factori de creștere hematopoietici, precum și o consecință a grefarea temporare a celulelor donator (ca o confirmare - o creștere semnificativă a conținutului de sânge periferic hemoglobinei fetale destinatar 7-15 a zi după transfuzie, comparativ cu valoarea inițială). Absența în destinatarii reacțiilor post-transfuzie de sânge din cordonul ombilical - rezultatul tolerantei sale relative de celule ale sistemului imunitar, precum și criteriul de încredere utilitatea materialului biologic crioconservate.

Celulele progenitoare limfocite T killer de sânge din cordonul ombilical capabil de activare sub influența stimulării citokinelor exogene, care este utilizat pentru a dezvolta noi ex vivo și in vivo metode de inducere a celulelor citotoxice limfoide anti-tumorale pentru imunoterapie transplant ulterioare. În plus, „imaturitate“ a genomului celulelor imune din sânge ombilical permite utilizarea lor pentru creșterea activității antitumorale prin modelare moleculară.

Astăzi, sângele din cordonul ombilical a fost utilizat pe scară largă în special în Hematologie Pediatrica. La copiii cu leucemie acută allotransplantation de celule stem hematopoietice de sânge din cordonul ombilical, comparativ cu alogrefe de măduvă osoasă, reduce semnificativ incidența reacției „grefă contra gazdă“. Cu toate acestea, este de notat pe o perioadă lungă de neutropenie și trombocitopenie, și, din păcate, un nivel mai ridicat de mortalitate de 100 de zile post-transplant. O perioadă mai lungă de recuperare în granulocitelor din sângele periferic și trombocite ar putea fi din cauza diferențierii insuficiente a subpopulatii individuale de celule CD34 pozitive ale sângelui din cordonul ombilical, așa cum sa evidențiat prin nivelul redus de absorbție a rhodamina radioactiv și exprimarea scăzută a antigenelor CD38 pe suprafața lor.

În același timp, transplantul de celule stem hematopoietice din sângele ombilical al pacienților adulți, efectuate din cauza lipsei atât a unui donator de măduvă osoasă care nu au legătură compatibile, precum și oportunități de mobilizare autolog HSC au aratat supravietuire anuale de mare fără recidivă la pacienții cu vârsta sub 30 de ani (73%) . Extinderea intervalului de vârstă al beneficiarilor (18-46 ani) a dus la o scădere a ratei de supraviețuire la 53%.

Analiza cantitativă a celulelor cu fenotip CD34 + măduva osoasă și din cordonul ombilical sange a aratat mai mare (de 3,5 ori), conținutul lor în măduva osoasă, dar sângele din cordonul ombilical au aratat o predominare semnificativă a celulelor cu profil fenotipică CD34 + HLA-DR .Izvestno, markeri chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR prolifera mai activ decât celulele cu immunophenotype CD34 + HLA-DR +, așa cum au confirmat în studiile experimentale ale creșterii culturii pe termen lung a celulelor hematopoietice in vitro. Progenitoare celule primitivi cu fenotip CD34 + CD38 conținute în sângele din cordonul ombilical și măduva osoasă, dar celulele din sângele cordonului ombilical cu marker set CD34 + CD38 au activitate clonogenică mai mare decât celulele hematopoietice ale aceluiași fenotip, izolat din maduva osoasa donator adult. In plus, celulele din sângele cordonului ombilical cu CD34 + CD38 immunophenotype vor prolifera ca răspuns la stimularea cu citokine (IL-3, IL-6, G-CSF) și reproduce 7 ori mai multe colonii în culturile pe termen lung decât celulele din măduva osoasă.

Băncile de celule stem din cordonul ombilical

Pentru buna dezvoltare a noului domeniu al medicinii practice - transplantul de celule stem din sânge din cordonul ombilical, precum și pentru a efectua transplanturi de celule stem maduvei osoase hematopoietice, trebuie să aveți o rețea extinsă de bănci de sânge, care sunt deja stabilite în SUA și Europa. Rețelele intrastatale de bănci de sânge din cordonul ombilical sunt unite de Asociația Băncilor Netcord. Fezabilitatea creării unei asociații internaționale a băncilor de sânge din cordonul ombilical este determinată de faptul că, pentru a efectua transplanturile care nu au legătură nevoie de un număr mare de probe de sânge din cordonul ombilical tastate, care permite de a alege donator HLA-identice. Doar instituirea unui sistem de bănci cu depozitarea probelor de sânge de diferite tipuri de HLA în ele poate rezolva cu adevărat problema găsirii donatorului necesar. Organizarea unui astfel de sistem de bănci de sânge din cordonul ombilical necesită elaborarea preliminară a normelor etice și legale, care sunt discutate în prezent la nivel internațional.

Pentru a crea bănci de sânge din cordonul ombilical în Ucraina, este necesar să se elaboreze o serie de dispoziții și documente.

În primul rând, acestea sunt întrebări legate de standardizarea metodelor de prelevare, fracționare și înghețare a sângelui ombilical. Este necesar de a reglementa normele de colectare a sângelui ombilical din cordonul ombilical, în spitale, în conformitate cu cerințele de etică medicală, pentru a determina cantitatea minimă de sânge din cordonul ombilical, care oferă un transplant de succes. Ar trebui să fie comparat și standardizarea diferitelor criterii de evaluare a calității și a numărului de celule precursoare hematopoietice precum și metode HLA-tipizare și metodelor de diagnosticare a bolilor genetice și infecțioase care pot fi transmise prin infuzia de celule sanguine din cordonul ombilical stabilite criterii generale de selecție a donatorilor sănătoși. De asemenea, merită discutată crearea unor facilități de depozitare separate pentru ser, celule și ADN derivate din sângele din cordonul ombilical.

Este absolut necesar să se organizeze o rețea informatică de date privind sângele din cordonul ombilical pentru punerea în aplicare a relației cu registrele donatorilor de măduvă osoasă. Pentru a dezvolta în continuare transplantologia celulară, ar trebui dezvoltate protocoale speciale pentru compararea rezultatelor transplantului de sânge din cordonul ombilical și a transplantului de măduvă osoasă de la rudele identice cu HLA și donatorii independenți. În care se ocupă cu probleme etice și juridice ale utilizării clinice a celulelor sanguine din cordonul ombilical poate ajuta la standardizarea documentației, inclusiv consimțământul informat al părinților, precum și o notificare a mamei sau rudelor copilului identificat prin genetice și / sau boli infecțioase.

Condiția determinantă pentru dezvoltarea transplantului de celule din Ucraina va fi adoptarea Programului Național pentru donarea de celule stem și dezvoltarea cooperării internaționale cu alte țări, prin intermediul Asociației Mondiale de donator de maduva osoasa (WMDA), programul de donator de maduva osoasa US National (NMDP) și alte registre.

Generalizând istorie încă scurtă de transplant de celule stem hematopoietice din sângele din cordonul ombilical, observăm că prima ipoteză a posibilității de aplicare clinică a sângelui din cordonul ombilical, realizat la începutul anilor 70, au fost confirmate în 80 de ani, rezultatele studiilor experimentale la animale, și în 1988 an a fost efectuat primul transplant din lume a celulelor hematopoietice din sângele din cordonul ombilical uman, și apoi a început să dezvolte o rețea globală de bănci de sânge din cordonul ombilical. După 10 ani, numărul pacienților cu celule hematopoietice transplantate ombilicale mai aproape de sânge din cordonul ombilical la 800. Dintre acestea au fost pacienți cu diferite boli tumorale (leucemie, limfom, tumori solide) si non-tumorale (imunodeficiență congenitală, anemie, boli asociate cu tulburări metabolice) natura.

În sângele din cordonul ombilical, conținutul progenitorelor celulare devreme și angajat este mai mare decât în sângele periferic al unui adult. Prin numărul de unități de formare a coloniilor de granulocite-macrofage și a potențialului lor proliferativ, sângele ombilical depășește în mod semnificativ sângele periferic al adulților chiar și după introducerea factorilor de creștere. În culturile de celule pe termen lung in vitro, a existat o activitate proliferativă mai mare și viabilitatea celulelor din sângele ombilical decât celulele din măduva osoasă. Momentele critice în transplantul de celule stem din sângele din cordonul ombilical sunt potențiale hematopoietice număr și nucleate celule, prezența infecției cu citomegalovirus, donator compatibil HLA și destinatarul, greutatea corporală și vârsta pacientului.

Cu toate acestea, transplantul de celule stem din sângele ombilical ar trebui considerat o alternativă la transplantul de măduvă osoasă pentru tratarea bolilor severe de sânge, în special la copii. Probleme clinice ale transplantului de celule sanguine din cordonul ombilical rezolvate treptat - există tehnici de eșantionare deja destul de eficiente, separarea și crioconservarea celulelor sanguine din cordonul ombilical, cu condiția ca condițiile de formare a băncilor de sânge din cordonul ombilical, metodele de testare sunt îmbunătățite celulele nucleate. Separarea optima in timpul celulelor stem hematopoietice sângele din cordonul preforme pe scară largă în stabilirea băncilor ar trebui să fie considerată ca o soluție de 3% din gelatină și soluție de hidroxietil amidon 6%.

Perehrestenko P. și colab (2001) evidențiază în mod corect că transplantul de celule stem din sange din cordonul ombilical ar trebui să aibă locul său de drept în măsurile terapeutice complexe pentru a depăși depresia de hematopoieza de diferite origini, ca GSK de sânge din cordonul ombilical diferă într-o serie de avantaje importante, printre care important este ușurința relativă de recoltare, nu există nici un risc pentru donator, contaminarea scăzută a celulelor neonatale cu virusuri și cost relativ scăzut al transplantului. Unii autori sugerează că transplantul de celule sanguine din cordonul ombilical mai puțin frecvent decât celulele din măduva osoasă este însoțită de complicații asociate cu reacția „grefă contra gazdă“, care se datorează, în opinia lor, o expresie slabă în celulele din sângele cordonului de antigene HLA-DR și lor imaturitate. Cu toate acestea, populația principală de celule nucleate din sângele din cordonul ombilical sunt limfocite T (celule-SDZ pozitive), al căror conținut este de aproximativ 50%, ceea ce este cu 20% mai mică decât în sângele periferic al unui adult, dar diferențele fenotipice ale subpopulații de celule T din acestea sursele sunt nesemnificative.

Printre factorii care afectează în mod direct supraviețuirea transplantului de celule stem din sangele din cordonul ombilical, ar trebui să notăm vârsta pacienților (cele mai bune rezultate sunt observate la destinatari cu vârsta de până la 5 ani), diagnosticarea precoce a bolii si o forma de leucemie (eficienta este semnificativ mai mare în leucemia acută). De mare importanță sunt doza de celule nucleare din sângele ombilical, precum și compatibilitatea lor cu HLA cu destinatarul. Nu este o analiză accident eficacitatea clinică a transplantului de sânge din cordonul ombilical GSK in oncologie si Hematologie prezinta cele mai bune rezultate ale tratamentului folosind transplanturi legate de: un an de supraviețuire fără boală, în acest caz ajunge la 63%, în timp ce transplantul nu are legătură - doar 29%.

Astfel, prezența unui număr mare de celule stem din sangele din cordonul ombilical și de mare capacitatea repopulyatsionnaya neonatale celule stem hematopoietice le fac potrivite pentru transplant alogenic la pacienți cu tumori maligne hematologice. Cu toate acestea, rețineți că recapitularea hematopoiezei după transplantul de celule stem hematopoietice de sânge din cordonul ombilical „este întins în timp“: restaurarea conținutului în neutrofilele din sângele periferic apare de obicei spre sfârșitul a 6 săptămâni, iar fenomenul trombocitopenie dispar, de obicei, după 6 luni. În plus, imature de sange care formeaza celule de sânge din cordonul ombilical nu exclude un conflict imunologic: curs sever de „grefă contra gazdă“ acută și cronică de reacție observate respectiv la 23 și 25% dintre destinatari. Recidivele de leucemie acută până la sfârșitul primului an de după transplantul de celule sanguine din cordonul ombilical se gasesc in 26% din cazuri.

[10], [11]