Expert medical al articolului
Noile publicații
Analiza polimorfismului lungimii fragmentului de restricție
Ultima examinare: 23.04.2024
Tot conținutul iLive este revizuit din punct de vedere medical sau verificat pentru a vă asigura cât mai multă precizie de fapt.
Avem linii directoare de aprovizionare stricte și legătura numai cu site-uri cu reputație media, instituții de cercetare academică și, ori de câte ori este posibil, studii medicale revizuite de experți. Rețineți că numerele din paranteze ([1], [2], etc.) sunt link-uri clickabile la aceste studii.
Dacă considerați că oricare dintre conținuturile noastre este inexactă, depășită sau îndoielnică, selectați-o și apăsați pe Ctrl + Enter.
Utilizarea pe scară largă a diferitelor endonucleaze de restricție pentru analiza ADN-ului cromozomal a evidențiat o variabilitate uriașă în genomul uman. Chiar și modificările mici în regiunile de codificare și reglare ale genelor structurale pot duce la terminarea sintezei unei anumite proteine sau la pierderea funcției sale în organismul uman, care afectează de obicei fenotipul pacientului. Totuși, aproximativ 90% din genomul uman constă din secvențe necodificatoare care sunt mai variabile și conțin multe așa numite mutații neutre sau polimorfisme și nu au o expresie fenotipică. Astfel de situri polimorfe (loci) sunt utilizate în diagnosticul bolilor ereditare ca markeri genetici. Locurile polimorfe sunt prezente în toate cromozomii și sunt legate de o regiune specifică a genei. După determinarea localizării locusului polimorf, este posibil să se stabilească cu care genom este asociată o mutație care a cauzat boala la pacient.
Pentru a izola regiunile polimorfe ale ADN-ului, se folosesc enzime bacteriene - enzime de restricție, ale căror produse sunt situsuri de restricție. Mutațiile spontane care apar în locurile polimorfe le fac rezistente sau, invers, sensibile la acțiunea unei enzime de restricție specifice.
Variabilitatea variabilă în situsurile de restricție poate fi detectată prin modificarea lungimii fragmentelor ADN restricționate, prin separarea acestora prin electroforeză și prin hibridizarea ulterioară cu sonde specifice de ADN. În absența unei restricții într-un sit polimorfic, un fragment mare va fi detectat pe electroforegrame și, dacă este prezent, va fi prezent un fragment mai mic. Prezența sau absența unui situs de restricție în locurile identice ale cromozomilor omologi face posibilă etichetarea fiabilă a genei mutante și normale și urmărirea transmiterii acesteia la descendenți. Astfel, în studiul ADN-ului pacienților, în ambii cromozomi din care este prezent un situs de restricție în regiunea polimorfă, se vor prezenta fragmente scurte de ADN pe electroforegrama. La pacienții homozigoți pentru o mutație care modifică un situs de restricție polimorfic, vor fi detectate fragmente de lungime mai mare și în fragmente heterozygioase vor fi identificate fragmente scurte și lungi.
[