Diagnosticul herpesului

Diagnosticul de herpes se bazează pe comportamentul varsare viral clasic în culturi celulare sensibilă, imunofluorescența și metode serologice, efectuarea studiilor colposcopic folosind metode moleculare biologice moderne (PCR, dot-hibridizare), care permite diagnosticarea tuturor din grupul herpesvirus, inclusiv HHV-6 si HHV-7 tipuri.

Metode de diagnostic de laborator a infecției herpetice

Principalele metode care vizează secreția HSV sau detectarea particulelor virale și / sau a componentelor acestora	Metode auxiliare destinate detectării anticorpilor la HSV în lichide biologice ale corpului uman
Izolarea HSV în culturi sensibile de celule și animale Microscopia electronică directă și imună Opțiuni MFA directe și indirecte IFA Metode biologice biologice Latex reacție de aglutinare	Reacție de neutralizare RSK Determinarea anticorpilor față de proteinele nestructurale ale HSV-1,2

Se observă că 76% dintre pacienți au herpes genital (GH) cauzat de HSV-2 și în 24% - HSV-1. Și GG ca monoinfecție a apărut numai la 22% dintre pacienți, în 78% din cazuri, au fost detectate asociații microbiene. La 46% dintre pacienți, sa detectat parazitocenoza cauzată de doi agenți patogeni, inclusiv 40% din cazurile de chlamydia. Mai puțin frecvent în frotiuri determinate în grădină, Trichomonas, gonococi.

La 27% dintre pacienți, parazitocenoza a fost reprezentată de trei și de 5,2% de patru agenți patogeni. Mai mult, o combinație de chlamydia cu Gardnerella și ciuperci din genul Candida a fost mai des observată. Aceste date justifică necesitatea unei examinări bacteriologice aprofundată a pacienților YY pentru a identifica combinații de agenți patogeni, precum și studiul aprofundat al patogeneza infecțiilor mixte ale tractului urogenital, ceea ce ar permite o terapie diferențiată complexă a infecției cu HSV.

Materiale care trebuie studiate în izolarea HSV în funcție de localizarea leziunilor herpetice

Localizarea leziunilor	Conținutul veziculelor	Ștergerea celulelor				SMZ	Se aspiră din bronhii	Specimen de biopsie	Sânge
		1	2	3	4
Piele	+								+
Ochi			+						+
Organele genitale				+					+
Anus	+				+				+
Gură	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Plămâni		+					+		+
Ficatul								+	+
Herpesul congenital	+	+	+				+		+

Metode de diagnostic de laborator a infecției cu citomegalovirus

Metode	Timpul necesar pentru obținerea rezultatelor	Notițe
Virusologice
Electron microscopie	3 ore	Malodostupen
Izolarea virusului în cultura celulară (CPD)	4-20 zile	Standard, lent
Colorația imunofluorescentă a AH precoce cu anticorpi monoclonali	6 ore	Mai puțin specific
TSITOLOGICHESKIY	2-3 ore	Mai puțin specific
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 zile	Standard
Ssubsistence	1 zi	Consumatoare de timp
RIF	6 ore	Simplu, specific
FIND	6 ore	Complex
RIMF	6 ore	Complex
IFA (IgM, TO)	6 ore	Rapid, simplu
Imunoblotare	6 ore	Scump
Biologice moleculare
MG	5-7 zile	Costisitoare, consumatoare de timp
PCR	3 ore	Scump

Metode de diagnosticare a virusului herpes zoster

Metode de diagnosticare	Tehnici de laborator
INDIRECTE
Alocare	Cultura de țesut, embrioni de pui, animale de laborator, co-cultivare cu celule permisive sau virusuri helper
Identificarea izolatelor	Reacția de neutralizare, DSC, IF, IPPE, reacția izotopilor precipitatei, aglutinarea, IF
STRAIGHT
Citologie	Smears: imunofluorescență color
Histologie	Pathomorfologia celulei
Structură	Microscopie embrionară, microscopie imunoelectronică
Determinarea antigenilor	IF, PIÉF, RIM, IFA
Determinarea producției locale de anticorpi	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Abordări biologice biologice	Hibridizare moleculară, PCR

Diagnosticul de laborator al infecției provocate de virusul herpes zoster

Probleme de diagnosticare	Metode	Rezultate așteptate
Infecție primară acută	1	Detectarea după 2 ore
	2	Nivelul de anticorpi crește încet
	3	Prezentă la 3 zile după infecție
Infecție reactivă acută	1	Detectarea ULV în 2 ore
	2	Nivelul de anticorpi crește încet
	4	Prezentat la 4 zile după apariția erupțiilor cutanate

1. determinarea în lichid a veziculelor WIEF;
2. serologie: DSC, ELISA, care vizează identificarea
3. serologie: ELISA, destinat detectării IgM;
4. serologie: ELISA, care vizează detectarea IgA, IgM.

Metode de indicare a răspunsului imun al unei infecții datorate virusului herpes zoster

Abordare	Metodă
Detectarea titrului de anticorpi crescut în serul secund	RSK, RTGA, RPGA, reacția de neutralizare IF, RIM, ELISA
Detectarea anticorpilor Ig G, Ig A de clasă în prima probă de ser	IFA, IF, RIM, aglutinarea latexului

Interpretarea rezultatelor examinării serologice a serului pacientului pe infecții cu herpesvirus (ELISA)

Denumirea infecției / markerului	Praguri medii pentru infecții
	Rezultatele analizelor	Interpretare
Cytomegalia IgG anti-CMV (1-20 E / ml) IgM anti-CMV (100-300%)	Pozitiv 1-6 pozitiv 6-10 pozitiv> 10 negativ pozitiv 100-300 negativ <90 îndoielnic 90-100	Remunere Agravarea bolii Faza acută a bolii Fără infecție (boală) Faza acută a bolii Repetați analiza după 2-3 săptămâni
Herpes simplu 1,2 serotipuri Anti-HSV 1/2 total. (1-900%)	Pozitive 100-400 Pozitive 400-800 Pozitive> 800 Negative <100	Remisia Agravarea bolii Faza acută a bolii Nu există infecție (boală)

Tabelul prezintă principalele metode de diagnosticare a infecțiilor cu virus herpes, precum și materiale biologice recomandate care sunt investigate pentru izolarea HSV, ținând cont de localizarea leziunilor herpetice

Fiabil este alocarea de herpes simplex și CMV prin infectarea culturilor celulare sensibile. Astfel, în examinarea virusologică a 26 de pacienți în perioada de recădere, HSV a fost izolat pe o cultură sensibilă de celule vero în 23 de cazuri (88,4%). În culturile infectate, a fost observat un model de acțiune citopatică caracteristică HSV - formarea de celule gigantice multinucleate sau acumularea de celule rotunjite și lărgite sub formă de ciorchini. În 52,1% din cazuri, a fost posibil să se detecteze focarele efectului citopatic al virusului cu 16-24 ore după infecție. Prin 48-72 ore de incubare a culturilor infectate, procentul de materiale care determină distrugerea celulelor specifice a crescut la 87%. Și numai în 13% din cazuri, rezultatele pozitive au fost detectate la 96 de ore după infecție și mai mult sau cu pasaje repetate.

Metode de diagnostic de laborator a infecției herpetice generalizate

Principalele metode au vizat detectarea (izolarea) virusurilor herpetice, a particulelor și componentelor acestora	Metode auxiliare care vizează detectarea anticorpilor la virusurile herpetice în lichide biologice, detectând deplasări enzimatice în serul de sânge
Izolarea virusului Herpes pe culturi celulare sensibile și animale de microscopie electronică directă și imunitar Metoda imunoperoxidază directă și indirectă de forme directe și indirecte opțiuni de tehnica anticorp fluorescent opțiuni ELISA materializări ale (ADN-ADN) molecular hibridizați Polymerase Chain Reaction aglutinare Reaction latex	Neutralizarea complement reacție de fixare reacție latex aglutinare indirectă fluorescentă Metoda anticorp realizare indirectă variantă metoda imunoperoxidază Intrupari ELISA Metoda imunitar blotting fixarea radială a complementului Metoda Determinarea nivelurilor alanin și aspartat

Metodele serologice sunt utilizate pentru a diagnostica mononucleoza infecțioasă (infecție provocată de VEB). Reacția lui Paul Bunnel cu eritrocitele unui berbec, un titru de diagnostic de 1:28 și mai mare cu un singur studiu al serului sau o creștere de 4 ori a anticorpilor în examinarea serurilor pereche. Utilizați reacția Goff-Bauer cu o suspensie de 4% celule roșii sanguine formalizate ale calului. Rezultatul este luat în considerare după 2 minute, cu mononucleoza infecțioasă, reacția fiind foarte specifică.

În prezent, se dezvoltă o imunotestare enzimatică (ELISA) pentru a diagnostica mononucleoza infecțioasă. În acest caz, anticorpii IgG și IgM din serul pacientului sunt determinați prin incubarea acestuia cu limfoblaste infectate cu EBV, urmată de tratamentul cu anticorpi fluorescenți. În perioada acută a bolii, anticorpii la antigenul capsid viral sunt determinați la un titru de 1: 160 și mai sus.

Atunci când se utilizează un număr de sisteme de testare comerciale importate IFA pot identifica: la anticorpi ant plic Egan EBV la antigenul timpuriu al EBV, anticorpul global la un antigen timpuriu al EBV, determinat în faza acută a bolii și în nucleu și în citoplasmă, și anticorpul limitat EBV timpuriu, determinat în faza acută a bolii și în nucleu și în citoplasmă celulelor, mărginite anticorpi la antigen timpuriu EBV, determinate în mijlocul bolii numai în citoplasmă celulelor și anticorpi la antigenul nuclear EBV. Utilizarea acestor sisteme de testare permite diagnosticarea diferențiată a unui număr de boli asociate cu EBV.

După ELISA pozitiv pentru a identifica anticorpii EBV dau imunoblot răspuns de confirmare, care a detecta prezența anticorpilor pentru a separa proteine marker EBV (p-proteine): P23, P54, p72 (prezența proteinei sugerează posibilitatea reproducerii EBV), p 138. Said deasupra metodelor de laborator sunt utilizate pentru a controla eficacitatea tratamentului.

Sensibilitatea metodelor virologice este de 85-100%, specificitatea este de 100%, timpul de studiu este de 2-5 zile. Deseori, în practică, se folosește metoda imunofluorescenței directe (PIF) cu anticorpi policlonali sau monoclonali împotriva HSV-1 și HSV-2. Metoda UIF poate fi reprodusă cu ușurință într-un laborator clinic convențional, nu este costisitoare, sensibilitatea este peste 80%, specificitatea este de 90-95%. Prin microscopie imunofluorescentă a relevat prezența unor incluziuni citoplasmatice, caracteristici morfologice, procentul de celule infectate in frotiurilor, răzuirea uretral, canalul cervical, colul uterin, rect.

Metoda UIF dă o idee despre proprietățile morfologice ale celulelor și despre modificările localizării antigenei HSV. Pe lângă semnele directe de deteriorare a celulelor de către virusurile herpetice (detectarea luminiscenței specifice), există semne indirecte de infecție herpetică conform datelor UIF:

• agregarea materiei nucleare, exfolierea karyoolma;
• prezența așa-numitei. Nuclee "găuri", când numai o karyolemă rămâne din nucleul celulei;
• prezența incluziunilor intranucleare - vițelul lui Caudry.

La stabilirea medicul UIF primește nu numai de calitate, dar, de asemenea, o evaluare cantitativă a celulelor infectate pe care le-au fost utilizate pentru a evalua eficacitatea tratamentului antiviral cu aciclovir (AC). Astfel, 80 de pacienți cu herpes genital simplu (GG) au fost examinați prin metoda UIF în dinamică. Se arată că, dacă, înainte de tratamentul cu aciclovir în frotiu 88% dintre pacienți au avut un procent ridicat de celule infectate (50-75% și mai sus), după un ciclu de aciclovir în frotiurile 44% dintre pacienții cu celule sănătoase detectate în 31% din cazuri sunt celulele infectate individuale marcate și 25% dintre pacienți au avut până la 10% din celulele infectate.

Conținutul celulelor infectate în frotiuri (reacția PIF) la pacienții cu herpes genital, tratați cu aciclovir

Perioade de boală	Procentul în frotiuri
	Celulele infectate					celule normale
	Mai mult de 75%	50-75%	40-50%	10%	Celule unice în n / sp
Recidiva (înainte de tratament)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisie (după tratament)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Folosind mulți ani de UIF și metoda hibridizării punctuale, aproape 100% din cazuri au coincis cu rezultatele studiului. Trebuie remarcat faptul că, în scopul de a crește fiabilitatea diagnosticului de GH, în special în cazurile în care există subclinice și forme malomanifestnyh de herpes, se recomandă să se utilizeze 2-3 metoda de diagnostic de laborator, în special atunci când examinarea femeile gravide, femeile cu antecedente obstetricale defavorizate, persoanele cu diagnostic ginecologic nespecificat.

Deci, atunci când diagnosticarea PCR a infecțiilor virale-bacteriene ale tractului urogenital este necesară evaluarea rezultatelor pozitive obținute luând în considerare anamneza, prezența (sau absența) simptomelor clinice specifice ale bolii. Dacă se detectează chlamidia prin PCR, atunci în acest caz este posibil să se vorbească despre infecție și să se rezolve problemele de terapie în consecință. În cazul detectării micoplasme (ureaplasme) sunt agenți patogeni oportuniști, pentru a confirma diagnosticul este obligat să efectueze studii suplimentare de cultură, t. E. Crop materialul de la un pacient sensibil la culturile de celule. Doar atunci când se obțin rezultate pozitive în analiza culturii, putem vorbi despre confirmarea în laborator a diagnosticului de micoplasmoză. Aceeași metodă va permite, dacă este necesar, determinarea sensibilității micoplastelor izolate la formele medicinale utilizate frecvent (antibiotice, fluorochinolone etc.).

Poate o infecție într-o singură etapă cu mai mulți viruși ai familiei Nepresviridae. Adesea am detectat infecția unui pacient cu virusuri HSV-1, HSV-2 și CMV. Mult mai frecvent infectate cu mai mulți viruși herpetici au fost pacienții cu manifestări clinice și de laborator ale IDS secundare (pacienți cu cancer oncohematologic, oncologic, infectați cu HIV). Astfel, se demonstrează că tulburările clinice și imunologice care progresează cu infecția cu HIV sunt însoțite de o creștere a numărului de virusuri herpezi detectați prin hibridizare moleculară. În acest punct de vedere prognostic cel mai semnificativ poate fi considerat o detecție complexă într-o singură etapă a ADN de tip HSV-1, CMV și HHV-6.

[1], [2], [3]