Virusul hepatitei B

Hepatita B este o boală infecțioasă a unei persoane caracterizată prin afectarea selectivă a ficatului de către un virus. Această formă de hepatită este cea mai periculoasă în consecințele sale în rândul tuturor formelor cunoscute de hepatită virală. Agentul cauzal este virusul hepatitei B (HBV).

În primul antigen al virusului hepatitei B a fost detectat B. Blumberg în 1964 în aborigine australian ser, iar agentul patogen a fost găsit în anul 1970, D. Dane (și colab.), Și a primit numele de particule Dane, deoarece nu a existat nici o certitudine că , că acesta este într-adevăr un virus, nu componentele acestuia. Ulterior, toate îndoielile au dispărut, deoarece în particulele Dane s-au găsit ADN genomic și o ADN polimerază dependentă de ADN viral. Virionul conține trei antigene principale, pentru care au fost introduse următoarele denumiri în 1974:

• HBsAg este un antigen superficial, solubil sau australian.
• HBcAg este un antigen de bază (co-antigen).
• AgHBe - antigen e, este localizat în nucleul virionului și, spre deosebire de HBcAg, nu numai că este prezentă în virion, dar, de asemenea, circulă în sânge într-o formă liberă sau sub forma unui complex cu anti-AgHBe. Se secretă în sânge din hepatocite cu replicare activă a VHB.

Antigenul de suprafață - HBsAg - există sub forma a trei variante morfologic diferite: 1) reprezintă supercapsidul întregului virion; 2) în cantități mari apare sub formă de particule cu un diametru de 20 nm, având o formă sferică; 3) sub formă de filamente cu lungimea de 230 nm. Din punct de vedere chimic, ele sunt identice. Compoziția are un antigen total de AgHBs și două perechi de determinanții tip specific care se exclud reciproc: d / y și w / r, astfel încât există patru subtipuri majore HBsAg (și deci HBV): adw, adr, ayw și aur. Antigenul a asigură formarea unei imunități cruce comune pentru toate subtipurile virusului.

De fapt, virionul, particula Dain, are o formă sferică și un diametru de 42 nm. Supercapsidul virionului este alcătuit din trei proteine: principal (principal), mare și mediu. Genomul este închis într-o capsidă și este reprezentat de un ADN inelar dublu-catenar cu o masă de 1,6 MD. ADN-ul este format din aproximativ 3200 nucleotide, dar "plusul" acestuia este cu 20-50% mai scurt decât semnul minus. Cu capătul 5 'al filamentului lung, proteina specifică virusului este legată covalent. Capetele 5 'ale ambelor fire sunt complementare și formează secvențe "lipicioase" de 300 nucleotide în lungime, astfel încât filamentele sunt închise în inel. Conținutul de G + C în ADN virion este de 48-49% mol. În miezul virionului există ADN-ul genomic ADN-viral ADN-polimerază dependentă de ADN. ADN-ul "minus" al ADN-ului HBV conține doar patru gene (S, C, P și X), dar acestea sunt organizate foarte compact. Genele S, C, P, X se suprapun puternic și controlează sinteza următoarelor produse. Gene S codifică sinteza proteinei principale de acoperire și conține toate informațiile despre antigenul de suprafață al HBsAg. În plus, codifică sinteza proteinelor plicului mediu și mare. Proteinele conțin un terminal comun COOH, dar traducerea lor începe cu trei codoni diferiți de inițiere. Codurile Gene C pentru sinteza proteinelor capsidice (HBcAg și HBeAg); deși aceste proteine sunt codificate de o singură genă, căile de traducere sunt diferite. Gene P este cel mai mare. Acesta include o parte din toate celelalte trei gene și codifică enzimele necesare pentru replicarea virusului. În particular, codifică revers transcriptaza, domeniul enzimei RNA-ase H, proteina 5'-terminală a lanțului "minus". Gene X codifică proteine care reglează expresia (expresia) tuturor genelor virale, în particular o proteină cu o masă de 17 kD, care este un transactivator de transcriere a genei.

Proteinele care formează un antigen de suprafață există în formă glicozilată (gp) și non-glicozilată. Glicozilați sunt gp27, gp33, gp36 și gp42 (numerele sunt notate cu MM în kD). Supercapsidul HBV constă din proteina S principală sau bazică (92%); proteina medie M (4%) și proteină L mare sau lungă (1%).

• Proteina principală, p24 / gp27 sau proteina principală (proteina S), este componenta principală a plicului HBV. În absența altor proteine de coajă, aceasta polimerizează și formează particule sferice cu un diametru de 20 nm, care constă din 100 de molecule de polipeptidă.
• O proteină mare, p39 / gp42 sau o proteină lungă (proteina L), este prezentă în toate cele trei forme de HBsAg. Acesta joacă un rol important în morfogeneza virionilor și în ieșirea lor din celulă. L-proteină conține secvența proteinei M, care este completat de secvențe N-terminale ale 108 (ayw) sau 119 (ADW, adr, ayr) resturile de aminoacizi codificată regiunea NPE-Sl-S-gene.
• Proteina medie - gp33 / gp36 sau proteina M este de asemenea prezentă în toate cele trei forme morfologice ale HBsAg. Proteina M conține, la capătul N-terminal, o regiune cu 55 resturi de aminoacizi codificată de regiunea pre-52 a genei S. Se presupune că acest sit joacă un rol important în recunoașterea virusului hepatitei B de către celulele hepatice dintr-o gamă limitată de gazde (maimuță umană, cimpanzeu). Secvențele proteice codificate de regiunile S-genă npe-S au imunogenitate ridicată, iar determinanții lor sunt localizați pe suprafața virionului. Prin urmare, anticorpii împotriva acestor antigeni joacă un rol important în formarea imunității împotriva hepatitei B.

Sinteza proteinelor virale este strict controlată la nivelul transcrierii și traducerii. În transcripția genomului viral, sunt sintetizate două tipuri de ARNm:

• un nucleu mai mic - 2100 nucleotide - codifică proteinele principale și medii ale membranei;
• mare - 3500 nucleotide, adică mai mult decât ADN genomic în sine; conține repetări terminale de lungime de 100 nucleotide.

Acest tip de ARNm codifică proteina capsidă și produsele genei P. Este, de asemenea, un șablon pentru replicarea ADN-ului viral. Ca parte a genomului, există amplificatori (enhancers de transcripție) - elemente de reglementare care activează expresia tuturor genelor virale și acționează în primul rând în celulele hepatice. În special, gena S este exprimată la un nivel foarte ridicat numai în celulele hepatice și sub influența hormonilor steroizi. Această circumstanță explică de ce hepatita cronică B și cancerul hepatic (hepatom) sunt observate la bărbați mai des decât la femeile care au un nivel mai scăzut de hormoni steroizi.

Alte elemente de reglementare ale virusului hepatitei B modulează (controlează) nivelurile de sinteză a proteinelor individuale. De exemplu, o proteină mare este sintetizată numai în cantități mici. Majoritatea pe suprafața virionilor infecțioși. Iar proteina principală și, într-o măsură mai mică, proteina de mijloc sunt sintetizate în cantități imense și părăsesc celulele în particule de antigen de suprafață, care conțin în ser multe ori mai mult decât virionii maturi. Numărul de particule de antigen de suprafață poate fi 1011-1013 per 1 ml de sânge (câteva sute de pg).

Virusul hepatitei B este izolat într-o nouă familie de virusuri - Hepadnaviridae, genul Ortohepadnavirus. Hepadnavirusuri similare au fost găsite în diferite animale (proteine de pământ, marmote, chipeșuri, rațe Peking).

Reproducerea hepadnavirusurilor are loc într-un mod neobișnuit. În special, replicarea ADN-ului genomic survine prin legătura intermediară - ARN, adică cu mecanismul de transcriere inversă.

Ciclul de viață al virusului hepatitei B.

• Adsorbția pe celulă.
• Pătrunderea în celulă prin mecanism mediat de receptor endocitoză (pit invecineaza -> Flacon invecineaza -> lizozomi -> exit nucleocapsidei și intrarea a genomului viral în nucleul hepatocitară).
• Reproducerea intracelulară.

În timpul penetrării în celulă, lanțul ADN scurt ("plus") se extinde (se completează). În nucleu, polimeraza ARN dependentă de ADN-ul celular sintetizează un ARN de 3500 nucleotide (pregenes) și mRNA mai mici pentru sinteza proteinelor virale. Apoi, pregenolul și ADN-polimeraza virală sunt ambalate într-o capsidă nouă sintetizată, care este transferată în citoplasmă. Aici se produce transcrierea inversă a pregenomului. Sintetizează un nou ADN "minus". După terminarea sintezei ADN minus, ARN pregenomic este distrus. Polimeraza ADN virion din lanțul "minus" sintetizează un "plus" lanț. ADN-ul viral, acum dublu-catenar, poate exista în celulă pentru o perioadă lungă de timp și se poate reveni la nucleu pentru următorul ciclu de replicare. Dacă noua particulă de virus nu este supus în continuare replicare, nucleocapsida format prin trecerea prin membrana celulară, acoperit superkapsidom, mugur din celulă, și este oprită imediat prelungire scurtă a „plus“ ADN-ul catenei. De aceea lungimea acestui thread variază. Într-o formă tipică acută a markerilor serologici pentru hepatita B. Următoarele secvențial apar în sânge: AgHBs, AgHBe și anticorpi (IgM, IgG): anti-Ag HBc. Anti-HBeAg și anti-HBsAg.

Compoziția virusului hepatitic B au oncogene, dar a constatat că, pătrunzând în cromozomul celular (în secțiunile sale diferite), ADN-ul viral poate fi indus în ele diferite de reglare genetică - ștergere, translocația, amplificare, ceea ce poate duce la dezvoltarea cancerului hepatic - unul dintre cele mai grave consecinte ale hepatitei virale B.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8],

Rezistența virusului hepatitei B

Virusul hepatitei B este foarte rezistent. La temperatura camerei, acesta rămâne viabil timp de 3 luni, în stare congelată - timp de mai mulți ani. Virusul este complet inactivat prin autoclavare (120 ° C) la reflux timp de 30 min, cu căldură uscată, la o temperatură de 180 „C timp de 60 min, la 60 ° C -. Timp de 10 ore rezistente în mediu acid, dar este distrus într-un alcalin. Virusul moare atunci când este tratat cu H202, cloramină, formalină, fenol și cu iradiere UV.

Patogeneza și simptomele hepatitei B

Virusul este injectat hematogen direct în ficat. În patogeneza hepatitei, răspunsurile umorale și celulare autoimune joacă un rol important. Se presupune că pierderea hepatocitară datorată nu atât de mult la acțiunea directă a virusului în sine, dar cu gazda reacțiile imunologice care au loc în legătură cu modificarea membranei celulare a proteinelor virale care induc apariția autoanticorpilor celulelor hepatice. Prin urmare, dezvoltarea hepatitei cronice și a cirozei hepatice poate fi considerată o boală autoimună.

Reacțiile autoimune celulare la proteinele virale conținute în membrana hepatocitelor sunt mediate de limfocitele T-citotoxice și de alte celule ucigașe hepatice. Prin urmare, distrofia acută a ficatului poate fi considerată ca o reacție de respingere a unui heterograf ciudat.

Perioada de incubație durează între 45 și 180 de zile, în medie între 60 și 90 de zile. Cursul clinic al hepatitei B se caracterizează printr-o mare diversitate; boala poate să apară: într-o formă latentă, detectată numai prin metode de laborator, într-o formă tipică icterică și într-o formă malignă care se termină letală. Durata stadiului pre-icterizat variază de la o zi la câteva săptămâni. Perioada icterica este de obicei lung si se caracterizeaza prin simptome bine definite (icter, hiperbilirubinemie, urina inchisa la culoare, icter sclera). Formularul tergiversările se observă la 15-20% dintre pacienți și 90% dintre ei dezvolta hepatita cronică B. Pacienții cu formă cronică procese autoimune frecvent observate sunt însoțite de un conținut ridicat de anticorpi protivopechenochnyh care sunt detectate prin testul immunosorbent (IPM) legat de enzimă. La copii, hepatita B este ușoară și adesea fără icter, la copiii mici - mai ales asimptomatici.

Imunitatea postinfecțioasă (umorală și celulară) este lungă, pe tot parcursul vieții, datorită anticorpilor neutralizanți ai virusului (anti-HBsAg), în absența antigenului de suprafață în sânge. Adesea, se observă o imunizare latentă datorită contactului repetat cu HBV, care este cauza imunității răspândite la virus în rândul populației. De obicei, pacienții cu formă acută de hepatită B se recuperează complet pe măsură ce anticorpii se acumulează. Cu toate acestea, în unele cazuri, în ciuda nivelului ridicat de antigen viral în sânge (o circumstanță care explică de ce apare cea mai frecventă infecție parenterală), nu se produc anticorpi la acesta. Virusul rămâne în ficat, iar o persoană pentru o lungă perioadă de timp, uneori pentru viață, devine un purtător cronic. Această circumstanță este în mod evident legată de un răspuns imun slab. Unul dintre cele mai frecvente rezultate ale hepatitei cronice B este ciroza și cancerul hepatic, care se dezvoltă după o perioadă latentă de până la 30-50 de ani.

Epidemiologia hepatitei B

Sursa infecției cu virusul hepatitei B este doar o persoană. Contrar reprezentărilor anterioare că infecția cu virusul hepatitei B are loc exclusiv pe cale parenterală, este acum dovedit că se găsește în diferite secreții și excreții :. Saliva, secreții nazofaringiene, fecale, lichid lacrimal, spermă, sânge menstrual etc. Astfel, infectia se produce nu numai pe cale parenterală, dar, de asemenea, sexual și verticală (de la mamă la făt), t. E. Practic infecția cu virusul hepatitei B poate, în multe feluri.

Hepatita B din lume a ucis atâția oameni ca în toți anii celui de-al doilea război mondial. Numărul de purtători de VHB, conform OMS, este de la 0,1 la 20% din populația din diferite țări sau regiuni.

[9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16],

Diagnosticul hepatitei B

În prezent, principala metodă pentru diagnosticarea hepatitei B este utilizarea unei reacții de hemaglutinare pasivă inversă (ROSGA) pentru detectarea unui virus sau a antigenului său de suprafață, HBsAg. După cum sa observat deja, sângele antigenului de suprafață conține de multe ori mai mult decât virusul în sine (de 100-1000 de ori). Pentru reacția ROPGA, eritrocitele sunt sensibilizate cu anticorpi împotriva virusului hepatitei B. Dacă există un antigen în sânge, apare o reacție de hemaglutinare. ROPGA este simplu, convenabil, foarte specific. Pentru a detecta anticorpi la antigenul virusului HBsAg, se folosesc diferite metode imunologice (DSC, RPGA, IFM, RIM etc.). În plus, variantele PCR sunt utilizate pentru a detecta HBV și antigenele acestuia.

Pentru detectarea anticorpilor la antigenul viral (HBsAg) în serul pacientului (DSC, RPGA, reacția de precipitare, IFM, RIM, etc.) pot fi utilizate diverse metode imunologice.

[17], [18], [19], [20], [21], [22],

Prevenirea specifică a hepatitei B

Având în vedere incidența ridicată a hepatitei B și, de asemenea, că există o mulțime de purtători de VHB în lume, vaccinările OMS împotriva hepatitei B sunt obligatorii și trebuie efectuate în primul an de viață. Două tipuri de vaccinuri sunt sugerate pentru vaccinare. Pentru a pregăti una dintre ele, plasma de purtători de virus este folosită ca materie primă, deoarece antigenul virusului din acesta este conținut în cantități suficiente pentru prepararea vaccinului. Condiția principală pentru prepararea acestui tip de vaccin este siguranța completă a acestora, adică inactivarea completă a virusului, care este furnizată de tehnologia de preparare a vaccinurilor. Pentru fabricarea unui vaccin de tip diferit, se utilizează metode de inginerie genetică, în special, pentru prepararea materialului antigenic se utilizează o clonă recombinantă de drojdie care produce antigenul de suprafață al virusului hepatitei B.

Ambele vaccinuri sunt foarte eficiente (protejează 95% din vaccinate). Durata imunității postvaccinală nu este mai mică de 5-6 ani. Vaccinurile au fost create atât pentru adulți, cât și pentru sugari și copii mici - cea mai importantă componentă a luptei globale împotriva hepatitei B. Modul complet de vaccinare constă în trei injecții:

I doze - imediat după naștere; Doza II - după 1-2 luni; III până la sfârșitul primului an de viață.

Aceste vaccinuri sunt incluse în programul extins de imunizare, OMS și aliniat cu calendarul punerii sale în aplicare (conform recomandărilor OMS privind primul an de viață se efectuează vaccinarea împotriva tuberculozei, poliomielitei, hepatita B, rujeolă, tetanos, difterie, pertussis).

Gammaglobulina, care conține anticorpi împotriva VHB, este utilizată pentru imunoprofilaxia pasivă de urgență la persoanele care au avut contact cu un pacient cu hepatită B.

Pentru a trata hepatita B (forme acute și cronice), utilizați interferon și amixină (pentru inducerea sintezei sale endogene). În tratamentul hepatitei cronice B, un nou medicament lamivudină (nucleozidă sintetică) este eficient.